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葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠肾脏GLUT2及肾功能的影响
目的：观察葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠肾组织GLUT2及肾功能的影响。方法：将SD雄性大鼠随机分为对照组、糖尿病模型组、两个葡萄籽原花青素组。两个葡萄糖花青素组分别给予200mg·kg-1·d-1、400mg·kg-1·d-1灌胃，对照组和模型组灌等体积的生理盐水，8周后测定各组大鼠血NO、Ccr、尿蛋白定量，并处死大鼠取肾检测肾脏肥大指数，以免疫组化和免疫荧光技术检测肾组织GLUT2的表达。采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素8、转化生长因子。结果：与对照组比较，糖尿病模型组大鼠肾脏GLUT2表达明显增加，NO水平、Ccr、尿蛋白定量、IL-8、TGF-β、肾脏肥大指数显著升高（P<0.05），NO/ET显著降低（P<0.05）；与模型组比较，葡萄籽原花青素组大鼠肾脏GLUT2表达明显减少，NO水平、Ccr、尿蛋白定量、IL-8、TGF-β、肾脏肥大指数活性显著降低（P<0.05），NO/ET显著增高（P<0.05）。结论：葡萄籽原花青素能够降低肾脏GLUT2表达，在一定程度上改善DN模型大鼠肾脏损伤。
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慢性间歇性低氧对大鼠肾脏GLUT-2和IRS-2表达的影响
目的：探讨慢性间歇性低氧及复氧对大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2（GLUT-2）、胰岛素受体底物2（IRS-2）表达的影响。方法将大鼠分为对照组（control）、慢性间歇性低氧组（CIH）和慢性间歇性低氧后复氧组（RH），建立慢性间歇性低氧的动物模型，抽取动脉血立即行血气分析，过氧化物酶法检测血清中血糖及放射免疫法检测大鼠血清胰岛素。取出大鼠肾脏组织，qPCR法检测大鼠肾脏GLUT-2、IRS-2的mRNA表达，Western blot 法检测GLUT-2、IRS-2蛋白表达；免疫组化法检测大鼠肾脏GLUT2、IRS-2蛋白表达。结果 control组大鼠血氧饱和度≥95％，CIH组的血氧饱和度≤85％，RH组血氧饱和度≥86％；CIH组大鼠空腹血糖、血清胰岛素及胰岛素抵抗指数较control组、RH组明显升高（ P＜0.05）；RH组高于control 组（ P＜0.05）；GLUT-2、IRS-2的mRNA及蛋白表达较control组和RH组升高（ P＜0.05）；RH组高于control组（ P＜0.05）。结论慢性间歇性低氧升高大鼠空腹血糖，上调大鼠肾脏GLUT-2、IRS2的表达，增强胰岛素抵抗，降低胰岛素敏感性。
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海洛因依赖对大鼠胰岛β细胞表达胰岛淀粉样多肽和葡萄糖转运蛋白2的影响
目的 探讨海洛因依赖对胰岛β细胞表达胰岛淀粉样多肽(IAPP)和葡萄糖转运蛋白2(Glut2)的影响及引起表达变化的可能机制. 方法 正常SD大鼠66只,随机分为正常对照组、盐水对照组及海洛因依赖组.皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,分别于第10、17、24、31、38天取胰尾组织.应用免疫组织化学SABC法及图像分析、形态计量法进行研究. 结果 1.免疫组织化学法显示,胰岛β细胞IAPP的免疫反应阳性产物定位于胞质.Glut2的免疫染色见于胞膜.2.与正常组和盐水组比较,海洛因依赖组大鼠胰岛IAPP阳性细胞免疫反应明显增强;24d以后细胞面数密度加大,与正常及盐水对照组比较有显著性差异;图像分析显示,海洛因依赖组IAPP阳性细胞的平均灰度值降低(P<0.05),以38d时间点低.3.海洛因依赖组大鼠Glut2阳性细胞免疫反应也明显增强;图像分析显示海洛因依赖期间大鼠胰岛Glut2阳性细胞的平均灰度值下降,与正常及盐水对照组比较差异有显著性(P<0.05),也以38d时间点低. 结论 在海洛因依赖期间,胰岛β细胞通过增加细胞数以及合成增多的方式,使IAPP和Glut2的表达增多,并参与了大鼠海洛因依赖期间机体代谢以及糖代谢的调节过程.
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葡萄糖转运蛋白2在人脐带间充质干细胞向胰岛前体细胞分化过程中表达的变化
目的 探讨葡萄糖转运蛋白2(Glut2)在人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达变化.方法 分离、培养、鉴定及诱导hUMSCs,分别收集诱导过程中第7天、14天和21天细胞和细胞上清液,采用免疫细胞化学、ELISA、免疫荧光、Western blotting及Real-time PCR检测诱导后细胞相关蛋白和基因的表达.结果 免疫组织化学检测诱导后细胞胰腺十二指肠同源盒基因-l(PDX-1呈阳性表达;免疫荧光检测诱导后细胞Ngn3和胰岛素呈阳性表达;Western blotting检测Glut2在诱导过程中逐渐升高,诱导14 d达到峰值,与正常组比较P ＜0.01;Real-time PCR显示,Glut2基因自第7天即增高(P＜0.05).结论 hUMSCs经诱导后分化为胰岛前体细胞,表达Glut2后能引起胰岛素分泌,已初步具有胰岛B细胞功能.
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胰岛淀粉样多肽、葡萄糖转运蛋白2在海洛因戒断、脱毒和复吸大鼠胰岛β细胞中的表达
目的 探讨在大鼠海洛因戒断、脱毒治疗和复吸期间,胰岛淀粉样多肽(IAPP)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)在胰岛β细胞内表达的变化.方法 正常雄性SD大鼠32只,随机分为实验组(n=24)和正常对照组(n=8),实验组又分为海洛因依赖戒断组、美沙酮脱毒治疗组和海洛因复吸组.各组大鼠取胰腺组织,采用免疫组织化学SABC法及图像分析方法进行研究.结果 海洛因戒断时IAPP和GLUT2阳性细胞免疫染色较正常对照组变深,平均灰度值均低于正常组(P＜0.05),IAPP面数密度增大(P＜0.05);美沙酮脱毒期间,IAPP和GLUT2免疫阳性细胞染色变浅,平均灰度值较戒断时升高,与正常组差异无统计学意义,IAPP面数密度于正常组比较无明显差异(P＞0.05);海洛因复吸期间,IAPP和GLUT2阳性细胞免疫染色又加深,平均灰度值降低(P＜0.05),IAPP面数密度再次增大(P＜0.05).结论 在海洛因戒断和复吸期间,表达于大鼠胰岛β细胞的IAPP和GLUT2合成增加,美沙酮脱毒期间合成减少,两者变化规律一致,提示在海洛因戒断,脱毒和复吸过程中,两者的合成同步,可能参与调节海洛因戒断,美沙酮脱毒治疗及复吸大鼠机体能量代谢过程,与调节大鼠摄食、体重及保护胰岛细胞功能有关.
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热应激猪睾丸葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2的表达与定位
目的 探讨正常和热应激条件下,葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)在成年猪睾丸的表达和定位.方法 性成熟长白公猪9头,随机分为3组.局部阴囊热刺激组(n=3),用自制电热毯置阴囊42℃加热1h;环境热应激组(n=3),每天置于37 ～ 40℃猪舍环境3h,连续7d,每天于热处理结束后,将实验猪驱赶回21～ 25℃猪舍环境;对照组(n=3),饲养在21 ～ 25℃猪舍环境.局部热刺激6h后和环境热应激处理结束24 h后,手术摘除双侧睾丸.用Real-time PCR、Western blotting和免疫组织化学技术检测猪睾丸组织内GLUT1和GLUT2的表达.结果 Real-time PCR和Western blotting结果显示,与对照组相比,环境热应激组GLUT1蛋白和mRNA的表达差异不显著,局部阴囊热刺激组GLUT1蛋白和mRNA表达显著升高;环境热应激组和局部阴囊热刺激组,GLUT2蛋白和mRNA表达均显著升高.免疫组织化学结果发现,热处理前后,GLUT1蛋白在曲精小管内定位于精母细胞和圆形精子细胞;环境热应激组GLUT1蛋白染色与对照组相比,无明显差异,局部阴囊热刺激后,GLUT1染色变深,表达升高.热处理前后,GLUT2蛋白在曲精小管定位于生精细胞和支持细胞,环境热应激和局部阴囊热刺激导致GLUT2染色变深,表达升高.结论 葡萄糖转运蛋白GLUT1和GLUT2表达于猪睾丸曲精小管,环境高温和阴囊局部热刺激导致GLUT1和GLUT2在猪睾丸的表达水平改变,提示这两种葡萄糖转运蛋白在猪精子发生过程中发挥重要作用.
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胰岛淀粉样多肽、葡萄糖转运蛋白2在海洛因戒断、脱毒和复吸大鼠胰岛β细胞中的表达
目的 探讨在大鼠海洛因戒断、脱毒治疗和复吸期间,胰岛淀粉样多肽(IAPP)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)在胰岛β细胞内表达的变化.方法 正常雄性SD大鼠32只,随机分为实验组(n=24)和正常对照组(n=8),实验组又分为海洛因依赖戒断组、美沙酮脱毒治疗组和海洛因复吸组.各组大鼠取胰腺组织,采用免疫组织化学SABC法及图像分析方法进行研究.结果 海洛因戒断时IAPP和GLUT2阳性细胞免疫染色较正常对照组变深,平均灰度值均低于正常组(P＜0.05),IAPP面数密度增大(P＜0.05);美沙酮脱毒期间,IAPP和GLUT2免疫阳性细胞染色变浅,平均灰度值较戒断时升高,与正常组差异无统计学意义,IAPP面数密度于正常组比较差异不显著(P＞0.05);海洛因复吸期间,IAPP和GLUT2阳性细胞免疫染色又加深,平均灰度值降低(P＜0.05),IAPP面数密度再次增大(P＜0.05).结论 在海洛因戒断和复吸期间,表达于大鼠胰岛β细胞的IAPP和GLUT2合成增加,美沙酮脱毒期间合成减少,两者变化规律一致,提示在海洛因戒断,脱毒和复吸过程中,两者的合成同步,可能参与调节海洛因戒断,美沙酮脱毒治疗及复吸大鼠机体能量代谢过程,与调节大鼠摄食、体重及保护胰岛细胞功能有关.
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葡萄糖转运蛋白2和蛋白酪氨酸磷酸酶-1B在甲状腺毒症妊娠大鼠胰腺中表达的观察
目的：检测甲状腺毒症妊娠大鼠胰腺中葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）和蛋白酪氨酸磷酸酶‐1B（PTP‐1B）的表达，探讨其影响糖代谢的可能机制。方法雌性SD大鼠分为非妊娠组和待妊娠组，待妊娠组按雌雄比例2∶1合笼受孕后进一步分为单纯妊娠（R）组、妊娠期左甲状腺素钠低剂量（RA）组、妊娠期左甲状腺素钠中剂量（RB）组和妊娠期左甲状腺素钠高剂量（RC）组，非妊娠组进一步分为正常对照（N）组、左甲状腺素钠低剂量（A）组、左甲状腺素钠中剂量（B）组和左甲状腺素钠高剂量（C）组。予A、RA组（左甲状腺素钠50μg／100g）、B、RB组（左甲状腺素钠100μg／100g）、C、RC组（左甲状腺素钠150μg／100g）灌胃制造甲状腺毒症模型，N、R组予等量生理盐水。检测各组雌鼠甲状腺功能、FPG和FIns，Westernblot检测胰腺中GLUT2和PTP‐1B的表达。结果随着左甲状腺素钠剂量增加，N、A、B、C组和R、RA、RB、RC组游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）[（2.65±0.07）vs（4.05±0.10）vs（4.87±0.63）vs（5.62±0.73）pmol／L；（2.67±0.10）vs（4.07±0.09）vs（4.84±0.11）vs（5.65±0.18）pmol／L，P＜0.01]、游离甲状腺素（FT4）[（10.54±0.58） vs （13.46±0.78） vs （25.77±0.85） vs （36.58±0.91）pmol／L ；（10.61±0.79） vs （13.53±0.66） vs （25.90±1.12） vs （36.65±0.62）pmol／L ，P＜0.01]升高，促甲状腺激素（TSH）[（0.086±0.009） vs （0.029±0.002） vs （0.024±0.001） vs （0.018±0.002）μU／ml；（0.070±0.009） vs （0.027±0.002） vs （0.021±0.001） vs （0.015±0.002）μU／ml ，P＜0.01]降低。甲状腺毒症各组（A、B、C 组和 RA、RB、RC 组）FPG 较对照组（N 组和 R组）升高[（5.43±0.32）、（5.74±0.21）、（6.34±0.46） vs （4.98±0.25）mmol／L ；（5.37±0.48）、（5.78±0.39）、（6.45±0.44） vs （4.88±0.38）mmol／L ， P＜0.01]，C组FIns较N组升高[（10.40±1.52） vs （8.25±0.80）μU／ml ，P＜0.01]，妊娠各组（R、RA、RB、RC组）FIns较非妊娠各组（N、A、B、C组）升高[（9.16±1.28） vs （8.25±0.80）μU／ml；（10.40±1.31） vs （9.20±1.32）μU／m l；（10.41±1.43） v s （9.75±1.24）μU／m l；（11.09±1.17） v s （10.40±1.52）μU／m l ， P＜0.01]。Western blot结果显示，甲状腺毒症各组 GLUT2表达较 N、R组降低，PTP‐1B表达升高（P＜0.05）。结论 GLUT2及PTP‐1B可能与妊娠期合并甲状腺毒症雌鼠出现糖代谢异常相关。
关键词： 甲状腺毒症 妊娠 胰腺 葡萄糖转运蛋白2 蛋白酪氨酸磷酸酶-1B -
Exendin-4对游离脂肪酸介导的βTc6细胞GK和GLUT2表达改变的干预作用
目的 探讨Exendin-4在高脂状态下是否具有抗脂毒性及其相关的机制是否涉及葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖转运蛋白2 (GLUT2). 方法 应用不同浓度Exendin-4(5、10及50 nmol/L)孵育βTc6细胞不同时限(6、12及24 h),再予1mmol/L FFA作用24h后,检测细胞内GK和GLUT2表达情况.结果 Exendin-4干预6h,各组细胞内GK、GLUT2表达未见明显改变；当干预延长至12～24 h,随干预浓度增高,细胞内GK、GLUT2表达逐步升高. 结论 适宜浓度的Exendin-4干预一定的时限可上调脂毒性状态下胰岛β细胞GK和GLUT2的表达.
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钙通道和细胞内钙信号对小肠葡萄糖吸收的调节作用及机制
迄今为止葡萄糖在小肠黏膜的吸收机制已被系统地阐明和接受,即经典的钠葡萄糖同向转运体(SGLT1)介导的主动转运机制.此外,当肠腔葡萄糖浓度高于SGLT1的转运饱和度时,葡萄糖转运蛋白2(GluT2)可能一过性易位于小肠黏膜上皮细胞顶膜来参与葡萄糖的异化扩散吸收,但小肠黏膜上皮细胞葡萄糖吸收的调节机制仍然不是完全清楚.近年来钙离子通道(CRAC)及细胞内钙信号对葡萄糖的吸收调节作用备受关注,二者可通过调节肠道葡萄糖转运体SGLT1和GluT2的表达及功能来调节小肠葡萄糖的吸收.本文以CRAC及细胞内钙信号对小肠黏膜上皮细胞葡萄糖的吸收调节作用及其分子机制进行论述,希望能为肥胖及其相关疾病的防治提供新的视野及潜在的新药研发靶点.
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慢性间歇性缺氧对大鼠肝脏糖代谢的影响及机制
目的 探讨慢性间歇性缺氧对大鼠糖代谢的影响及机制.方法 24只成年雄性SD大鼠随机均分为对照(UC)组、慢性间歇性缺氧(CIH)组及复氧(RH)组,建模完成后行动脉血气分析.采用过氧化物酶法检测各组大鼠血清中空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平,ELISA法检测游离脂肪酸(FFA)、瘦素浓度,并分别采用qRT-P CR及Western blotting检测肝脏中葡萄糖转运蛋白2(GLUT-2)、胰岛素受体底物2(IRS-2)、瘦素mRNA及蛋白的表达水平.结果 CIH组大鼠血清FBG、FINS,FFA及瘦素浓度明显高于UC组(P＜0.05),而RH组则明显高于CIH组(P＜0.05).Western blotting及qRT-PCR检测结果显示,CIH组大鼠肝脏GLUT-2、IRS-2蛋白及mRNA表达明显低于RH组(P＜0.05),而RH组明显低于UC组(P＜0.05);CIH组大鼠肝脏瘦素蛋白及mRNA的表达明显高于RH组(P＜0.05),而RH组则明显高于UC组(P＜0.05).结论 慢性间歇性缺氧导致的胰岛素抵抗可能与大鼠血清FFA、瘦素升高以及肝脏GLUT-2、IRS-2表达降低,瘦素表达升高相关.
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基质硬度对人肾小管上皮细胞形态和葡萄糖转运蛋白表达的影响
肾小管间质纤维化以细胞外基质沉积、瘢痕硬化为特点,是慢性肾脏疾病发展至终末期肾衰竭的共通途径.本研究拟构建体外细胞培养模型探索基质硬度对肾小管上皮细胞形态和功能的影响.采用光催化成胶的聚丙烯酰胺凝胶(PAA gel)制备模拟肾间质纤维化组织硬度的凝胶基质(1～40 kPa);接种人肾小管上皮细胞(HK-2)于不同硬度的PAA gel表面,采用免疫荧光染色和共聚焦显微镜考察基质硬度对HK-2形态的影响,并对HK-2细胞上的葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和葡萄糖转运蛋白5(GLUT5)的分布进行定性和半定量考察.研究发现,随着基质硬度增加,HK-2细胞上的GLUT1表达量显著降低,GLUT5在细胞整体的表达量显著下降,而GLUT2的表达和分布未见明显改变.
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甲状腺素对大鼠糖代谢影响机制实验研究
目的 观察甲状腺素对SD大鼠胰岛β细胞凋亡核苷酸、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2蛋白(Bcl-2),肝细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)表达影响,以探讨甲状腺功能亢进时合并糖尿病或葡萄糖耐量降低的可能病理机制.方法 选择年龄3月左右、体质量210～240 g 健康SD大鼠20只进行实验,雌雄各半,实验组14只(E组,n=14),对照组6只(N组,n=6).E组以1 g/kg体质量优甲乐灌胃,N组以相应剂量单纯生理盐水灌胃,1次/d,连续2周后取胰腺和肝脏标本进行实验.采用免疫组织化学观察胰腺β细胞caspase-3、Bcl-2,肝细胞PPARγ、GLUT2;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察胰腺β细胞凋亡核甘酸.结果 E组caspase-3、TUNEL阳性率明显高于N组,在α=0.05水平上较N组差异有统计学意义(P<0.01);E组Bcl-2表达阳性率明显低于N组,在α=0.05水平上较N组差异有统计学意义(P<0.01).E组大鼠肝细胞PPARγ明显低于N组,在α=0.05水平上有显著差异(P＜0.01).GIUT2表达明显高于N组,在α=0.05水平上有显著差异(P＜0.01).结论 甲状腺素对在体大鼠胰岛细胞具有明显诱导凋亡作用,同时对大鼠肝细胞PPARγ和GLUT2表达影响显著,可能是甲状腺功能亢进时合并糖尿病及糖耐量异常重要病理机制.
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实验性2型糖尿病小鼠肝脏组蛋白H3表观修饰的变化及其意义
目的:研究肝脏组蛋白H3表观修饰的变化在2型糖尿病小鼠发病过程中的作用,探讨其临床意义.方法:30只C57BL/6J小鼠分为正常组、高脂高糖组和糖尿病组,正常组和高脂高糖组小鼠分别给予正常饲料和高脂高糖饲料,糖尿病模型采用高脂高糖饲料联合注射链脲佐菌素(STZ)方法构建.采用HE染色、免疫印迹法、实时定量PCR和ChIP技术分别检测小鼠肝脏病理学变化、肝脏中总组蛋白H3的修饰状况及与糖代谢相关基因丙酮酸激酶(Pklr)、葡萄糖转运蛋白2(Glut2)、葡糖糖激酶(Gck)、过氧化物酶体增生物激活受体γ辅助活化因子1 (Ppargc1a)和胰岛素受体(Insr)的表达水平和基因启动子区组蛋白的修饰变化.结果:糖尿病组小鼠肝脏病理学(HE染色)和组蛋白修饰模式均发生了明显变化.与正常组比较,高脂高糖组小鼠H3K23的乙酰化下降(P＜0.01),H3K9Ac和H3K9Me2修饰水平上调(P＜0.01),H3K4Me保持不变(P＞0.05),糖代谢相关基因Pklr、Glut2和Gck的表达水平升高(P＜0.01);糖尿病组小鼠H3K23Ac和H3K9Ac修饰水平下降(P＜0.05或P＜0.01),H3K9Me2和H3K4Me的修饰水平升高(P＜0.01),糖代谢相关基因Pklr、Glut2、Gck、Ppargc1a和Insr表达水平明显下调(P＜0.05或P＜0.01).Pklr、Glut2启动子区H3K23Ac、H3K9Ac、H3K9Me2和H3K4Me修饰水平变化与基因的表达水平变化相吻合.结论:肝脏组蛋白表观修饰变化可能参与了2型糖尿病的发生发展.
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葡萄糖转运蛋白2和4在自发高尿酸血症小鼠发生胰岛素抵抗中的作用
目的 探讨葡萄糖转运蛋白(GLUT)2和4是否参与高尿酸诱导的胰岛素抵抗.方法 选取C57BL/6雄性尿酸氧化酶基因敲除(urate oxidase knockout,KO)自发高尿酸血症小鼠和同窝野生型(wild type,WT)小鼠,均喂养高脂饮食,建立胰岛素抵抗模型.造模完成后从KO组中选取部分小鼠进行别嘌呤醇降尿酸治疗.测定血尿酸、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),并进行静脉注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT);实时定量PCR测定组织中溶质载体家族2成员4(Slc2a4)、Slc2a2 mRNA的表达,Western印迹检测GLUT2和GLUT4的蛋白表达量.结果 各组空腹血糖无明显差异;与WT组相比,KO组小鼠FINS水平升高[(0.636±0.07)对(0.456±0.03)ng/ml,P<0.01],KO组小鼠胰岛素敏感性下降,葡萄糖耐量受损;KO组小鼠尿酸一直保持在高水平[(549.68±48.7)对(216.61±27.5)μmol/L],别嘌呤醇降低尿酸水平后,胰岛素敏感性和葡萄糖代谢均改善.与WT组相比,KO组腓肠肌中Slc2a4/GLUT4表达水平下降,肝脏中Slc2a2/GLUT2表达水平升高,别嘌呤醇降尿酸后逆转了这种变化.结论 尿酸可能通过降低骨骼肌Slc2a4/GLUT4表达,升高肝脏Slc2a2/GLTU2表达诱导胰岛素抵抗.
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LRP16通过下调PPARγ表达抑制细胞葡萄糖摄取
目的 探讨人白血病相关蛋白16(LRP16)基因对细胞葡萄糖摄取的影响及分子机制.方法 将LRP16基因表达载体pcDNA3.1-16转染3T3-L1脂肪细胞、C2C12成肌细胞和HepG2肝癌细胞,建立LRP16基因高表达细胞系;利用2-脱氧-[~3H]-D-葡萄糖检测LRP16对葡萄糖摄取的影响;免疫印迹法检测LRP16对PPARγ葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)和GLUT-2表达的影响.结果 成功建立LRP16基因高表达细胞系,3组细胞中LRP16表达均为对照细胞的2倍;对照3T3-L1脂肪细胞、C2C12成肌细胞和HepG2肝癌细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率明显高于LRP16高表达细胞(P＜0.01);对照333-L1脂肪细胞、C2C12成肌细胞和HepG2肝癌细胞的PPARγ及GLUT-4或GLUT-2蛋白表达明显高于LRP16高表达细胞(P＜0.05).结论 LRP16通过下调PPARγ表达抑制细胞葡萄糖摄取.
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大黄酸改善糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素敏感性并增强肝脏PPARγ和GLUT-2的表达
目的 探讨大黄酸改善高脂喂养联合链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠血糖及肝脏胰岛素敏感性的作用及其可能机制.方法 (1)55只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC,n=15)和糖尿病组(DM,n=40).NC组以基础饲料喂养,DM组以高脂饲料喂养5周后给予一次性腹腔注射STZ(30ms/kg),其中30只成模大鼠再分为糖尿病模型组(DM-C)和糖尿病大黄酸治疗组(DM-T),后者即开始大黄酸灌胃(100 mg·kg-1·d-1),灌胃11周后处死动物,收集标本,记录体重、肝重,测定空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆同醇(TC)、HbA1C、糖化血清蛋白(GSP)等生化指标,放射免疫法测定血清胰岛素浓度(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).(2)免疫组化法检测肝脏组织中PPARγ的表达,Western印迹法检测肝脏组织中葡萄糖转运蛋白2(GLUT-2)表达.结果 实验结束时,测得DM-C组FBG[(22.57±3.23 vs 7.11±1.44)mmoL/L,P<0.01]、TG[(0.89±0.29 vs 0.58±0.17)mmoL/L,P<0.01]、HbA1C[(12.49±1.96 138 8.36±0.84)%,P<0.01]、GSP[(57.29±4.14 vs13.43±2.70)μmol/L,P<0.01]和肿瘤坏死因子α[TNF-α,(1.365±0.133 vs 1.233±0.159)μg/L,P<0.05]较NC组均显著升高.DM-C组肝重指数亦明显高于NC组(0.032±0.004 vs 0.024±0.002,P<0.01),FINS与NC组无明显差别,ISI较NC组下降明显[In(ISI),-5.46±0.61 vs -4.81±0.75,P<0.05],HOMA-IR较NC组升高[In(HOMA-IR),2.34±0.64 vs 1.70±0.78,P<0.05].DM-C组肝脏PPARγ [11 131.7(5 723.1-18 979.4) vs 48 782.1(21 576.7-108 829.5),P<0.01]和GLUT-2(0.98±0.35vs 1.29±0.27,P<0.05)表达较NC组有明显下降趋势.而DM-T组大鼠的FBG[(15.94±3.16)mmol/L]、HbA1C[(10.51±1.74)%]和GSP[(47.31±6.09)μmol/L]、In(HOMA-IR)(1.86±0.30)等较DM-C组均显著降低(P<0.05或P<0.01),In(ISI)(-4.97±0.29)较DM-C组升高明显(P<0.05).肝脏PPARγ/[35 156.3(24 554.3-86 660.9)],GLUT-2(1.55±0.55)蛋白表达水平较DM-C组明显增强(P<0.05或P<0.01).结论 大黄酸可降低糖尿病大鼠血糖、HbA1C及GSP、改善糖尿病大鼠胰岛素敏感性,其机制可能与增强PPARγ、GLUT-2蛋白表达有关.
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大黄素通过激活PPARγ促进HepG2细胞葡萄糖摄取
目的 构建PPARγ和PPARγ应答元件(PPRE)荧光素酶系统,并确定大黄单体成分大黄素是否能够通过激活PPARγ促进HepG2肝细胞葡萄糖摄取.方法 (1)构建PPARγ和PPRE荧光素酶系统并对20余种中药成分进行筛选;(2)将能够激活PPARγ和PPRE系统的大黄素与HepG2肝细胞进行培养,分别用RT-PCR/Southern杂交测定PPARγmRNA的表达;(3)用Western印迹法测定大黄素处理后的HepG2细胞的PPARγ和葡萄糖转运蛋白2(Glut2)的表达水平;(4)测定大黄素作用后的HepG2细胞对2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄取率.结果 (1)在筛查的中药成分中,大黄素作用24 h后,呈剂量(0.04～180 μmol/L)依赖性地增强COS-7细胞PPRE荧光素酶活性,其中90 μmol/L浓度时达到高值,为对照组的4倍(P＜0.01),而10μmol/L浓度的吡格列酮作用强度为对照组的6倍(P＜0.01);(2)大黄素在90μmol/L浓度时刺激HepG2细胞PPARγmRNA表达水平增加2.7倍(P＜0.01);(3)大黄素的作用呈剂量和时间依赖性地刺激HepG2细胞PPARγ和Glut2蛋白的表达水平.其中,PPARγ蛋白水平在90 μmol/L和作用16 h刺激作用强,约为对照组的3.1～3.8倍(P＜0.01);Glut2蛋白水平在90μmol/L和作用16 h刺激作用强,约为对照组的2.5～4.3倍(P＜0.01);(4)HepG2细胞的葡萄糖摄取率在90μmol/L浓度的大黄素作用24 h后,约为对照组的5倍(P＜0.01).结论 研究结果显示大黄素刺激HepG2肝细胞PPARγ和Glut2蛋白表达,并促进葡萄糖的摄取.
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高原低氧对大鼠消化吸收碳水化合物功能的影响
目的:目前,对于低氧条件下碳水化合物的消化吸收功能变化缺乏系统研究,尚不清楚低氧时碳水化合物的消化吸收有哪些变化特点.文中探讨高原低氧对大鼠消化吸收碳水化合物功能的影响及其机制. 方法:清洁级SD大鼠32只,随机分为平原对照组(N)和模拟5000m海拔低氧处理组(H),低氧组下设3、24、72h 3个时相点,分别为低氧3h组(H3h)、低氧24h组(H24h)和低氧72h组(H24h),每组8只,共4组.低氧组大鼠放入低压氧舱模拟海拔5000m高度低氧环境,分别在低氧处理3、24、72h后处死,取血清和小肠组织,测定血清淀粉酶(AMS)、过氧化氢酶(CAT)活性,检测小肠组织中双糖酶、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;并用RT-PCR检测小肠组织中葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)mRNA的表达水平. 结果:模拟高原低氧处理3h后,血清AMS和小肠组织双糖酶活性明显下降,与平原对照组有明显差异(P<0.05);小肠组织GLUT2 mRNA表达水平在低氧处理24h后显著降低(P<0.05);而血清CAT、小肠组织SOD活性及GSH含量在低氧处理3h后也明显降低(P<0.05);自由基产物MDA含量在低氧24h时显著升高(P<0.05). 结论:高原低氧可导致大鼠消化吸收碳水化合物能力下降,并可能与低氧引起的氧化应激损伤有关.
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灵芝多糖对大鼠胰岛细胞分泌胰岛素功能的影响
目的:探讨灵芝多糖(Gl-PS)对胰岛细胞分泌胰岛素的影响.方法:分离大鼠胰岛细胞,分别观察在葡萄糖为 5.6 和 16.7 mmol*L-1时,Gl-PS对胰岛细胞分泌胰岛素的影响.进一步加入不同的抑制剂观察Gl-PS对胰岛细胞分泌胰岛素的影响.采用Western blotting观察Gl-PS对胰岛细胞葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)表达的影响.结果:在 5.6 mmol*L-1葡萄糖时,100 mg*L-1的Gl-PS可明显促进胰岛细胞胰岛素的分泌;当葡萄糖浓度为 16.7 mmol*L-1时,50和100 mg*L-1的Gl-PS均可明显促进胰岛细胞胰岛素的分泌.维拉帕米或维拉帕米+EGTA均可显著抑制 5.6 和 16.7 mmol*L-1葡萄糖时胰岛素的分泌,维拉帕米只能部分抑制Gl-PS的促胰岛素分泌作用,而维拉帕米+EGTA则可完全抑制Gl-PS的这种作用.在葡萄糖浓度为 5.6 和 16.7 mmol*L-1时,Gl-PS 50和100 mg*L-1均能明显促进胰岛细胞GLUT2的蛋白表达.结论:Gl-PS可能通过促进胰岛细胞GLUT2蛋白的表达从而有助于葡萄糖转运入B细胞,促进葡萄糖的代谢,引起胰岛细胞外Ca2+内流而起到促胰岛素释放的作用.
