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用于阿糖鸟苷合成的腺苷脱氨酶在大肠埃希菌中的表达
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨合成阿糖鸟苷,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险.将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆至载体pET-28a中,然后转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21 (DE3),经过筛选获得工程菌Ecoli (add).经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测及酶活力测定,表明E coli (add)能够表达大量腺苷脱氨酶,其产酶能力是含空载质粒的BL21 (DE3)菌株E.coli (pET-28a)的16.2倍.以Ecoli (add)制备的粗酶液为催化剂,催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷发生脱氨反应得到产物阿糖鸟苷,转化率可达96.8%.
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铜绿假单胞菌催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷合成阿糖鸟苷
利用铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)细胞催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷进行脱氨反应转化生成阿糖鸟苷.经优化得到的适酶促反应条件为:在160 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.5)中加入13%铜绿假单胞菌TX16细胞和30 mmol/L阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷,反应温度60℃,反应120 h.在上述条件下,嘌呤核苷的转化率可达90.0%.
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埃希菌催化合成阿糖鸟苷中间体阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷
利用埃希菌(Escherichia sp.)AEM0812细胞催化阿糖尿苷和2,6-二氨基嘌呤合成阿糖鸟苷中间体阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷.通过优化反应条件,得到适酶促反应条件为:在60 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中加入15%埃希菌AEM0812细胞及60 mmol/L阿糖尿苷和60 mmol/L 2,6-二氨基嘌呤,60℃反应48 h.在上述条件下,阿糖尿苷的转化率可达952%.