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鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用
目的 研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用.方法 MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cyt c的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达.结果 鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P<0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cyt c蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P<0.01).流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加.结论 鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Pax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cyt c释放有关.
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香菇多糖诱导鼠肝癌H22细胞凋亡机制的初步探讨
目的:初步探讨香菇多糖诱导鼠肝癌H22细胞发生凋亡的效应及机制.方法:体外实验以不同浓度的香菇多糖作用于鼠肝癌H22细胞,通过PI单染色法检测细胞周期变化,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧水平,Fluo-3/AM染色法检测细胞内钙离子浓度.体内实验通过对肿瘤组织做病理切片,H-E染色观察细胞凋亡形态特征,免疫组化法检测蛋白分子Bcl-2及Bax的表达.结果:香菇多糖能够诱导H22细胞凋亡并呈剂量依赖关系,同时将细胞阻滞于G2/M期,荧光显微镜的定性观察表明香菇多糖能升高细胞内活性氧水平和钙离子浓度,H-E染色结果显示肿瘤组织中可见散在分布的凋亡细胞,免疫组化结果表明经香菇多糖处理后肿瘤组织中Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论:香菇多糖可能通过上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调原癌基因Bcl-2蛋白水平表达,将肿瘤细胞阻滞于G2/M期,进而启动细胞内凋亡程序,出现一系列凋亡细胞特有的形态学特征和生化特征,从而发挥抗肿瘤作用.
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全脑缺血再灌注后大鼠海马回中Bcl-2及Bax的表达
目的 探讨大鼠全脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后大脑海马回中Bcl-2及Bax的表达.方法 将48只SD大鼠随机分为假手术(SO)组24只;全脑缺血/再灌注(I/R)组24只,采用四血管阻塞法建立大鼠全脑I/R损伤的模型.用免疫组织化学SABC法检测大鼠海马CA1区锥体细胞中Bcl-2及Bax的表达,测量其平均灰度值,用苏木精-伊红(HE)染色检测存活锥体细胞数.结果 在I/R组,可见Bcl-2平均灰度值在3小时降低;Pax在3小时平均灰度值开始降低,12小时继续降低,24小时降低达到高峰,到48小时开始回升;存活神经元数目随再灌注时间的延长而减少(P均<0.01).结论 大鼠全脑缺血/再灌注后,Bcl-2和Bax参与了脑神经元凋亡的调控.
