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黑素瘤抑制蛋白在转基因小鼠胚胎乳腺组织中的表达
目的:检测黑素瘤抑制蛋白(MIA/CD-RAP)在小鼠胚胎乳腺组织中的表达.方法:剖腹分离出10.5～16.5 d的MIA/CD-RAP启动子-半乳糖苷酶(2.2lacZ)转基因小鼠胚胎,利用X-gal全胚胎染色观察转基因的组织和细胞染色,并以免疫组织化学染色检测内源性MIA/CD-RAP蛋白在胚胎乳腺组织中的表达.结果:MIA/CD-RAP在孕期11.5 d的小鼠胚胎乳腺上皮细胞中开始表达,至13.5 d表达明显增强,而后逐渐减弱,至16.5 d消失.结论:MIA/CD-RAP可能在乳腺的早期发育和乳腺癌发生中起重要作用.
关键词： 黑素瘤抑制蛋白 软骨衍生维甲酸敏感性蛋白 小鼠 转基因 乳腺 -
黑素瘤抑制蛋白启动子在小鼠体内的表达活性
目的:观察黑素瘤抑制蛋白(MIA/CD-RAP)启动子在小鼠体内的表达活性.方法:利用PCR技术扩增2.2 kb的MIA/CD-RAP启动子,分子克隆技术构建MIA启动子-半乳糖苷酶(2.2lacZ)载体,显微注射法将纯化的2.2lacZ DNA注入来自B6SJL杂交小鼠受精卵的原核以制备转基因小鼠.提取幼鼠尾DNA,用lacZ特异性引物筛选阳性转基因小鼠.结果:8只首建小鼠染色体基因组整合有2.2lacZ融合基因.X-gal全胚胎染色发现其中3只转基因小鼠在软骨和乳腺组织中均可见转基因的表达.结论:2.2 kb的MIA/CD-RAP启动子含有调节MIA/CD-RAP组织特异性表达的顺式调控元件.
关键词： 黑素瘤抑制蛋白 软骨衍生维甲酸敏感性蛋白 小鼠 转基因 基因调控 -
黑素瘤抑制蛋白MIA/CD-RAP在人乳腺癌组织中的表达
黑素瘤抑制蛋白(MIA)是Bogdahn等1989年在研究黑素瘤细胞株HTZ-19时分离到的一个能够抑制黑素瘤细胞增殖的因子,其基因与在软骨细胞内发现的CD-RAP基因相同.
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黑素瘤抑制活性蛋白作为血清标志物对恶性黑素瘤的诊断价值
恶性黑素瘤(malignant melanoma,MM)是起源于神经嵴黑素细胞的高度恶性肿瘤.由于MM具有高度侵袭性且转移后预后极差,寻找一个可以提示肿瘤进展并评估预后的诊断指标显得极为重要.黑素瘤抑制活性蛋白(melanoma inhibitory activity protein,MIA)是一种在MM患者体内特异性高表达的小分子蛋白,在转移性MM患者血清水平增高尤为明显.研究证实,MIA参与了MM的转移和免疫抑制,故检测MIA水平对监测原发灶切除后肿瘤的复发和转移十分必要,同时解决了传统复查方式的辐射暴露和高昂检测费用等问题.该文综述了近年来MIA的分子机制研究、MIA的检测方法及是否可作为预后指标,还综述了与其他血清标志物如S-100 β蛋白、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)结合,评估MM结局,认为MIA可成为评估MM进展及预后的指标.
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黑素瘤MIA启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统选择性杀伤黑素瘤细胞
目的:探讨黑素瘤抑制蛋白(melanoma inhibitory activity,MIA)启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统,对黑素瘤细胞A375的选择性杀伤作用.方法:构建腺病毒穿梭质粒pAdrMIA-CD/TK,在293细胞内包装、扩增、纯化后,体外转染人表皮黑素细胞HeMa-LP、黑素瘤细胞A375和人宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测基因CD和TK片段,加入前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或丙氧鸟苷(GCV),用MTT法测定该体系对细胞株的杀伤效应.结果:制备的病毒滴度为1×1011 pfu/L,用100m.o.i.重组腺病毒感染细胞后,发现目的基因CD和TK片段可在黑素瘤细胞中表达,转染目的基因的黑素瘤细胞A375对5-FC和GCV具有一定的敏感性,细胞存活率较对照组显著下降(P＜0.05),联合应用两种药物对A375细胞的杀伤作用较单用一种显著增强(P＜0.05).对人表皮黑素细胞HEMa-LP和人宫颈癌细胞HeLa无显著杀伤作用.结论:构建的黑素瘤MIA启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统,在体外可选择性杀伤黑素瘤细胞A375.
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人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因启动子的克隆及其鉴定
目的:克隆MIA/CD-RAP的启动子序列并对其进行酶切和DNA测序鉴定.方法:从培养的人黑素瘤细胞A375基因组DNA中扩增出MIA/CD-RAP启动子序列,并将其克隆到载体pGL2-Ba-sic上,再经酶切及PCR扩增鉴定和测序.结果:酶切电泳和DNA测序结果表明,已成功克隆了人黑素瘤MIA/CD-RAP启动子序列.结论:人黑素瘤MIA/CD-RAP启动子序列的克隆,可为进一步研究MIA/CD-RAP基因的表达调控奠定基础.
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人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因的克隆及其鉴定
目的为了研究人黑素瘤MIA/CD-RAP基因的生物学功能,克隆MIA/CD-RAP的cDNA,构建表达载体后,对其进行酶切和DNA测序鉴定.方法用RT-PCR从培养的人黑素瘤细胞A375中扩增MIA/CD-RAP cDNA,将其克隆到载体pcDNA3.1-MycHis上,经酶切及PCR扩增鉴定和测序.结果酶切电泳和DNA测序结果表明,成功地克隆了人黑素瘤MIA/CD-RAP cDNA.结论人黑素瘤MIA/CD-RAP cDNA的克隆,可为进一步研究其生物学功能奠定基础.
