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家族性高血钾型高血压Cullin3致病突变体neddylation异常的分子机制研究
目的 探讨Cullin3(CUL3)致病突变体Cullin3 △9(缺失9号外显子,CUL3 △9)是否由于与COP9信号体(CSN)结合减弱而导致其类泛素化修饰异常.方法 使用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基培养HEK293细胞株,采用脂质体转染技术,将CSN5 siRNA与FLAG-CUL3质粒或FLAG-CUL3 △9质粒共转染HEK293细胞,Western blotting观察CUL3和CUL3 △9类泛素化修饰程度的变化;转染FLAG-CUL3或FLAG-CUL3 △9质粒后,以金属蛋白酶抑制剂1,10-菲咯啉进行预孵育,Western blotting观察CUL3和CUL3 △9类泛素化修饰程度的变化;在转染FLAG-CUL3质粒和FLAG-CUL3 △9质粒后,以FLAG抗体与Dynabeads Protein G磁珠行免疫共沉淀,Western blotting观察CUL3或CUL3 △9与CSN5的结合状态.结果 转染CSN5 siRNA后,CUL3的类泛素化修饰程度增加,而CUL3 △9的类泛素化修饰程度无明显变化;以1,10-菲罗啉预孵育后,CUL3的类泛素化修饰程度增加,而CUL3 △9的类泛素化修饰程度无明显变化;免疫共沉淀结果显示CUL3与CSN5结合,而CUL3 △9与CSN5结合减弱.结论 CUL3 △9与CSN结合减弱导致类泛素化修饰异常.
关键词： 类泛素化修饰 Cullin3 COP9信号体 家族性高血钾型高血压 -
JAB1研究进展
JAB1可通过与AP-1特异位点的结合形成稳定复合物,促进靶基因的反式激活.JAB1可与三大类蛋白质相互作用:①C0P9信号体亚单位:C0P9信号体1、COP9信号体2、COP9信号体4、COP9信号体7.②细胞周期调节蛋白:p27Kip1、MIF.③AP-1转录调节蛋白:c-Jun,LFA-1,LHR,PR,SRC-1,Bcl-3,p53,HPO,HIF.JAB1参与许多信号转导通路,包括调节植物的光信号、线虫的幼虫发育、整合素信号、细胞周期调控和甾体类激素的信号转导.
