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siRNA抑制survivin的表达诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的研究
目的 筛选能有效抑制survivin基因表达的小干扰RNA(siRNA),探讨survivin基因抑制对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响.方法 设计3段survivin siRNA靶位点,用PCR扩增siRNA表达框,与survivin-绿色荧光蛋白融合基因表达质粒共转染293T细胞,再构建有效siRNA的表达栽体,转染卵巢癌SKOV-3细胞,分析survivin基因的表达及细胞凋亡情况.结果 筛选出了1段能高效抑制survivin表达的siRNA,能显著下调SKOV-3细胞内的survivin表达,并导致SKOV-3细胞凋亡.结论 利用RNA干扰能有效抑制survivin基因表达并诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡,为进一步的靶向survivin分子的体内抗肿瘤研究奠定了基础.
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口腔鳞癌中β-catenin和survivin的表达及相关性研究
目的:研究survivin蛋白和β-catenin在口腔鳞癌中的表达及其相互关系.方法:应用免疫组化SP法检测60例口腔鳞癌组织和20例正常口腔黏膜组织中survivin和β-catenin蛋白的表达.结果:20例正常口腔黏膜组织中β-catenin均正常表达,survivin均不表达.口腔鳞癌中β-catenin异常表达率为70%,survivin阳性表达率为66.7%.β-catenin和survivin表达与性别、年龄、鳞癌分化程度、临床分期、部位无关,而与淋巴节转移与否相关.β-catenin蛋白异常表达和survivin蛋白阳性表达呈正相关关系(r=0.231,p＜0.05).结论:β-catenin和survivin在口腔鳞癌的发生发展中可能具有协同作用.
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靶向survivin基因的shRNA质粒表达载体的构建
目的:利用pGenesil-1质粒构建靶向sunrivin基因的2个短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体.方法:设计2对shRNA,GC比在40%-55%之间,进而应用BLAST软件进行同源性剔除,保证所得shRNA序列靶向survivin基因,分别克隆至带有U6启动子的质粒pGenesil-1中,构建质粒表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增.提取质粒,酶切鉴定后测序分析.双酶切重组质粒进行酶切鉴定.结果:成功构建靶向survivin基因的2个shRNA质粒表达载体.经双酶切鉴定及质粒测序结果完全符合设计要求.结论:经鉴定设计的2条shRNA已成功连接于质粒上,可以应用于进一步RNA干扰试验.
