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F抗原文献资料
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大鼠肝脏F蛋白基因的克隆和表达
目的 获得大鼠肝脏F蛋白基因克隆(F-protein 's cDNA);利用原核(大肠杆菌)表达系统表达大鼠肝脏F蛋白. 方法提取大鼠肝脏总RNA,对其进行反转录和PCR(RT-PCR)扩增出目的基因(F-protein's cDNA),然后将其与pUCm-T载体进行连接获得克隆质粒pUCm-T- F并转化到大肠杆菌DH5α中;将测序结果正确的克隆片断重新与表达载体pET-15b连接,获得F抗原表达质粒pET15b-F并将其转化到表达菌株BL21(DE3)pLysS中,用1 mmol/L IPTG诱导其表达.结果 RT-PCR扩增出的目的基因(F-protein's cDNA),经测序证明与Gene-bank上提供的F蛋白cDNA序列完全一致;表达后的全菌蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白分子量大小约为43 kD,与预期值相符,表达量可达全菌总蛋白量的40%. 结论表达的目的蛋白经His-tag柱进行亲和层析纯化,SDS-PAGE 检测得到了不含其他杂蛋白的单一F蛋白条带,与豚鼠抗人F蛋白抗血清反应成阳性,说明我们经基因工程方法得到的纯化的F蛋白有免疫活性.
