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丁氏溃结灌肠液对溃疡性结肠炎模型大鼠黏膜组织炎症介质和PPAR-γ的影响研究
目的:研究丁氏溃结灌肠液对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织髓过氧化酶(MPO)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA、脂质过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)的影响,探讨其可能的作用机制.方法:SD大鼠通过DSS诱导建立急性期溃疡性结肠炎模型,造模成功的大鼠随机分为5组,分别为模型组、美沙拉秦灌肠液组(简称美沙拉秦组)和溃结灌肠液低、中、高剂量组,分别给予相应药物或生理盐水灌肠14d,另取正常大鼠作为空白组,空白组自由喂养.14d后处死全部大鼠,腹主动脉取血,取结肠标本观察肠黏膜变化情况,评估疾病活动指数(DAI),测定结肠组织MPO含量,酶联免疫吸附(ELISA)测定大鼠结肠组织IL-6、TNF-α含量,实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测大鼠结肠组织iNOS mRNA的表达水平,免疫组化检测大鼠结肠组织PPAR-γ的表达水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠DAI、结肠黏膜评分以及结肠组织MPO、IL-6、TNF-α含量, iNOS mRNA表达水平显著增加(P<0.05,P<0.01),PPAR-γ的表达水平显著减少(P<0.01).与模型组比较,丁氏溃结灌肠液各剂量组和美沙拉秦组上述指标明显改善(P<0.05,P<0.01).在对大鼠结肠黏膜组织inos基因、PPAR-γ蛋白表达的改善方面,丁氏溃结灌肠液高剂量组明显优于低剂量组(P<0.01).结论:丁氏溃结灌肠液可以上调UC模型大鼠PPAR-γ水平,减少脂质氧化产物MPO的产生,抑制炎症介质TNF-α、IL-6和炎症蛋白诱导型一氧化氮合酶的表达,从而减轻结肠炎症反应.
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丁氏溃结灌肠液对DSS诱导的溃疡性结肠炎大鼠肠道屏障的保护作用
目的:研究丁氏溃结灌肠液对葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠机械屏障、免疫屏障的影响,探讨其可能的作用机制.方法:50只SD大鼠采用DSS法建立急性期溃疡性结肠炎模型,造模成功后随机分为5组,分别为模型组、美沙拉秦灌肠液组和溃结灌肠液低、中、高剂量组,每组10只,另取10只大鼠作为空白对照组,分别给予相应药物或生理盐水灌肠14d.末次给药结束后,各组大鼠禁食不禁水24h,麻醉,取结肠标本观察肠黏膜变化情况,蛋白质印迹(Western Blot)法检测大鼠结肠组织紧密连接蛋白(occludin)含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清免疫球蛋白A(IgA)水平.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠occludin含量、IgA水平显著降低(P<0.01);经美沙拉秦灌肠液和丁氏溃结灌肠液治疗后,大鼠结肠组织occludin含量、IgA水平升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),尤以美沙拉秦灌肠液与溃结灌肠液高、中剂量组升高更为明显,而溃结灌肠液中、高剂量组与美沙拉秦灌肠液组治疗后上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:丁氏溃结灌肠液可以降低溃疡性结肠炎大鼠肠道通透性,对肠黏膜屏障有一定的保护作用,不同剂量的溃结灌肠液对肠黏膜屏障保护效果不同,中高剂量较低剂量组作用明显.
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基于蛋白芯片技术探讨丁氏溃结灌肠液对结肠炎大鼠肠道组织差异蛋白表达的影响
目的 基于蛋白芯片技术探讨丁氏溃结灌肠液对结肠炎大鼠肠道组织相关靶点的影响,阐释丁氏溃结灌肠液改善肠道炎症反应及肠纤维化的可能机制.方法 大鼠随机分为阳性药组、模型组、正常组、丁氏溃结灌肠液组,5只/组.除正常组之外,其他3组均给予3.5％硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium, DSS)喂养,结肠炎造模成功后,阳性药组使用美沙拉秦灌肠,丁氏溃结灌肠液组使用丁氏溃结灌肠液灌肠,每天1次,连续4周,停药1 d后,取大鼠结肠黏膜组织,采用GSR-CAA-67抗体蛋白芯片技术检测各组大鼠肠道组织炎症反应及肠纤维化相关蛋白的变化,筛选出各组差异性表达的蛋白.结果 通过蛋白芯片检测,发现共有8种有意义的差异蛋白,其中模型组和空白组对照组对比筛选出的8种蛋白包括IFN-γ、促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)、TIMP-2、TIM-1、 IL-6、TIMP-1、TNF-α、IL-22,差异均有统计学意义(P<0.05).另一方面,丁氏溃结灌肠液与美沙拉秦均对IL-6、TIMP-1有明显的抑制作用(P<0.05),丁氏溃结灌肠液对TNF-α、IL-22有抑制作用(P<0.05),美沙拉秦组则没有相同作用(P>0.05).结论 丁氏溃结灌肠液具有多靶点的作用,可能通过改善肠道炎症反应及肠纤维化达到治疗溃疡性结肠炎的目的.
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丁氏溃结灌肠液改善DSS诱导大鼠肠道炎症反应的机制研究
目的 观察丁氏溃结灌肠液对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导大鼠肠道炎症的疗效,探讨该药改善溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)可能的药理机制.方法 采用DSS诱导大鼠作为UC模型,随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪(mesalazine)组和丁氏溃结灌肠液(GCL)低、中、高剂量组,每组8只.给药后,观察大鼠结肠黏膜病理学改变,Western blot法检测结肠组织Myd88、NF-κB p65蛋白表达量,ELISA法检测血清中IL-6、TNF-α水平.结果 与空白组比,模型组大鼠结肠组织NF-κB p65、Myd88蛋白表达量和血清TNF-α、IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比,丁氏渍结灌肠液各剂量组和美沙拉嗪组大鼠结肠组织Myd88、NF-κB p65蛋白表达量和血清TNF-α、IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丁氏溃结灌肠液具有较好的抗炎、修复黏膜和促进溃疡愈合的作用,可能是通过抑制NF-κB信号通路的活性,减少炎症因子,从而发挥治疗UC的作用.
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丁氏溃结灌肠液对溃疡性结肠炎模型大鼠IL-22/STAT3通路的影响
目的:观察丁氏溃结灌肠液对葡聚糖硫酸钠(DSS)模型大鼠血清IL-22/STAT3信号通路的影响,探讨其改善溃疡性结肠炎肠道稳态的作用机制.方法:60只8周龄健康大鼠,分为空白组、模型组、丁氏溃结灌肠液组6 g/kg、3 g/kg、1.5 g/kg组、美沙拉秦2.4 g/kg组.除空白组,其他各组分别饮水喂食3.5％葡聚糖硫酸钠7天,进行药物灌肠治疗7天.酶联免疫法(ELISA)检测各组组织中IL-1β的含量及血浆中IL-22的含量;实时定量PCR检测各组结肠组织SOCS3 mRNA的表达水平;免疫印迹(Western blot)检测各组STAT3、磷酸化STAT3(p-stat3)及下游目标蛋白SOCS3的表达水平;免疫组化染色Ki-67评估各组结肠组织的增殖活性及状态.结果:与空白组比较,模型组IL-1β、IL-22含量显著升高,p-stat3蛋白表达水平显著升高,SOCS3蛋白表达水平无差异;SOCS3 mRNA表达水平显著下降,Ki-67染色阳性率显著上升;与模型组比较,丁氏溃结灌肠液组6g/kg、3g/kg、1.5 g/kg组及美沙拉秦2.4 g/kg组IL-1β、IL-22含量显著下降,p-stat3蛋白表达水平下降,ki-67染色阳性率显著下降.结论:丁氏溃结灌肠液改善溃疡性结肠炎的肠道稳态作用可能与提高IL-22含量,激活stat3通路,促进肠上皮细胞增殖有关.
