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一α2珠蛋白基因突变-IVS-Ⅱ-43(G→A)家系调查及临床表型分析
目的 对1例α2珠蛋白基因突变类型-IVS-Ⅱ-43(G→A)先证者进行家系调查,并进行临床表型分析.方法 采集家系成员外周血标本进行血液学表型分析,用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)法、PCR结合反向点杂交(PCR-RDB)法以及DNA测序方法对家系成员外周血样本进行常见的地贫基因类型检测和α-珠蛋白基因序列分析.结果 该家系成员中先证者及其双胞胎兄弟表现为平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)和血红蛋白浓度(Hb)降低的小细胞低色素贫血表型,父母红细胞参数结果均正常;各家系成员的血红蛋白分析结果显示HbA2均在正常参考区间,未发现异常血红蛋白.该家系成员均排除3种常见α-地贫基因缺失、3种常见α-地贫基因点突变和17种常见β-地贫基因点突变.α-珠蛋白基因测序检测结果显示先证者及其母亲携带α2珠蛋白基因IVS-Ⅱ43(G→A)杂合突变,其双胞胎兄弟和父亲未见异常突变.结论 该家系为α2珠蛋白基因突变类型-IVS-Ⅱ43(G→A),其杂合子携带者的血液学表型正常.
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特殊α-珠蛋白基因结构合并东南亚缺失的α-地中海贫血1例
目的 探讨1例特殊α-珠蛋白基因结构合并东南亚缺失的α-地贫患者的分子遗传学机制.方法 用血红蛋白(Hb)电泳分析该患者Hb含量,裂口PCR(gap-PCR)法检测缺失型α-地贫基因,反向斑点杂交技术(RDB)检测非缺失型α-地贫基因和β-地贫基因突变.结果 Hb电泳结果显示,该患者HbA含量为93.43％,HbA2为6.57％；缺失性α-地贫的电泳结果出现1 900、1 700、1 200 3条罕见条带；非缺失型α-地贫基因检测未发现HbCS、HbWS、HbQS突变；β-地贫基因突变为β41-42M/βN基因型.结论 该患者为α-珠蛋白基因结构(α2-α2α1)合并东南亚缺失导致的非Hb H病,且存在β-地贫,临床症状不明显.
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应用温度梯度凝胶电泳分析非缺失型α-地中海贫血突变
目的 建立用于非缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变筛查的温度梯度凝胶电泳(temperature gradient gel electrophoresis, TGGE)技术。方法 以不同基因型人基因组DNA为模板，选择性扩增全长α2-珠蛋白基因，继以巢式PCR扩增突变热点区域，然后建立并优化TGGE参数。在此基础上，筛查表型阳性的15例非缺失型α-地贫疑诊样品，阳性样品经DNA序列测定确认突变。结果 建立了分析543 bp PCR片段和α2珠蛋白基因全长1085 bp片段的TGGE技术，可检测出中国人群中常见的两种α-地贫点突变：Hb Constant Spring (Hb CS)和Hb Quong Sze(Hb QS)及Hb Westmead α2 CD122CAC→CAG(His→Gln)。15例样品中，10例为Hb CS，2例为Hb QS，2例为Hb Westmead, 1例为新的与Hb H病相关的突变α2 CD31 AGG→AAG(Arg→Lys)。结论 所建立的PCR-TGGE技术可用于非缺失型α-地贫点突变和α-珠蛋白基因多态性的分子筛查。
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PCR-LIS-SSCP快速分析非缺失型α-地中海贫血点突变
目的 建立一种简便快速的筛查非缺失型α-地中海贫血点突变的SSCP分析方法.方法 在选择性扩增α2珠蛋白基因的基础上,巢式PCR扩增突变热点区域,低离子强度(LIS)条件下将PCR产物热变性,用非变性胶电泳分析其SSCP.结果 LIS条件下处理样品,PCR产物变性效率明显提高,电泳结果可检出区别于野生型对照的3种含基因突变的电泳带型,且电泳时间仅需3小时.结论 PCR-LIS-SSCP可用于快速筛查非缺失型α-地中海贫血点突变.
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α-地中海贫血基因诊断应用进展
α-地中海贫血(α-Tha1或α-地贫)是1种常染色体隐性遗传性疾病,为血红蛋白合成过少性贫血,是世界上患病率高的单基因遗传病之一,在中国南方地区比较常见,其临床症状的轻重与珠蛋白α-链合成减少的程度相关,且目前尚无彻底根治的方案,但通过人群筛查对α-地贫的预防具有重要意义.根据α-珠蛋白基因的缺陷可将α-地贫分为缺失型和非缺失型2种突变类型,针对这2种类型的突变又分别有不同的基因诊断策略.
