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日本血吸虫双价DNA疫苗肌肉刺激和全身过敏试验
目的 观察日本血吸虫双价DNA疫苗对家兔肌肉注射所产生的刺激反应和豚鼠的全身过敏反应,评价其安全性.方法 家兔4只,雌雄各半,采用自身对照,左侧股四头肌注射日本血吸虫双价DNA疫苗,右侧注射生理盐水,观察注射部位肌肉的刺激反应,并进行病理组织学检查;豚鼠24只,随机分为4组,日本血吸虫双价DNA疫苗组(致敏剂量0.5 mg/只,激发剂量1 mg/只)、空白质粒对照组(致敏剂量0.5 mg/只,激发剂量1 mg/只)、生理盐水对照组和10%人血白蛋白阳性对照组,进行全身过敏试验.结果 日本血吸虫双价DNA疫苗对家兔肌肉局部刺激仅见注射部位轻度充血,未发现肌肉组织的变性和坏死;对豚鼠无过敏反应发生,10%人血白蛋白阳性对照组出现明显的过敏反应.结论 日本血吸虫双价DNA疫苗对家兔肌肉无刺激作用,对豚鼠也无过敏反应,预期临床应用安全.
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日本血吸虫双价DNA疫苗的致突变性研究
目的 评价日本血吸虫双价DNA疫苗的致突变性.方法 应用Ames试验、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验对日本血吸虫双价DNA疫苗进行初步评价和检测.结果 日本血吸虫双价DNA疫苗在S9活化和非活化两种测试条件下,在每皿6.25 ～ 100.00 μg浓度范围内,对3种菌株的回复菌落数与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P ＞ 0.05),Ames试验结果为阴性;日本血吸虫双价DNA疫苗各剂量组骨髓多染红细胞微核率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞ 0.05),试验结果为阴性;日本血吸虫双价DNA疫苗各剂量组染色体畸变率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞ 0.05),试验结果为阴性.结论 日本血吸虫双价DNA疫苗初步检测无致突变性.
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日本血吸虫双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23免疫方案的研究
目的 研究双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23在不同免疫剂量、免疫次数、免疫有效时间及不同免疫途径的佳免疫方案.方法 构建和制备双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23;110只雄性BALB/c小鼠随机分成11组,每组10只,按照四因素三水平分成2个对照组和9个实验组.各组统一在末次免疫后30 d每鼠感染(40±2)条日本血吸虫尾蚴,感染后45 d剖杀,计数成虫虫荷.结果 双价DNA疫苗9个实验组获得40.14%～62.68%的减虫率.通过SPSS 12.0进行正交设计的统计分析:F值＜F'临界值,P＞0.05.免疫剂量,免疫次数,免疫途径和免疫有效时间几个因素间差异无统计学意义.结论 实验结果提示该疫苗的较好免疫方案为:50μg/只,免疫2次,采取皮内注射,免疫有效时间至少为12周.
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日本血吸虫双价DNA疫苗对小鼠单次肌肉注射的毒性试验
目的 观察日本血吸虫双价DNA疫苗单次肌肉注射小鼠的急性中毒反应,初步评价其安全性.方法 40只BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为4组,即10、20 mg/kg给药组,空白质粒和生理盐水对照组,连续观察14 d.结果 各组动物无死亡,疫苗10 mg/kg组未见明显毒性反应,疫苗20 mg/kg组有个别动物出现短暂的活动减少,而空白质粒对照组出现活动减少和体重下降.结论 日本血吸虫双价DNA疫苗对小鼠单次肌肉注射给药无明显毒性反应,预期临床应用安全性好.
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日本血吸虫双价DNA疫苗体内外表达及持续时间的初步研究
目的 观察日本血吸虫双价DNA疫苗在体内外表达及体内表达的持续时间.方法 将构建的共表达日本血吸虫双价核酸疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj23瞬时转染HEK-293细胞,通过逆转录(RT-PCR)和间接免疫荧光试验(IFAT)检测真核细胞中SjFABP和Sj23基因及蛋白的表达.质粒经股四头肌注射免疫BALB/c小鼠12只,每月眼眶采血,并活体灌流小鼠2只,IFAT检测重组蛋白的原位表达,Western blot法检测血清中特异性抗体,持续观察6个月.结果 RT-PCR和IFAT证明质粒pVIVO2-SjFABP/Sj23能在体外表达.免疫后连续6个月,IFAT均检测到小鼠骨骼肌注射部位重组蛋白的原位表达,但Western blot未检测到血清中特异性抗体的存在.结论 日本血吸虫双价DNA疫苗在HEK-293细胞和小鼠骨骼肌中均能够正确地表达,体内表达持续时间至少在6个月以上.
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不同方式构建的日本血吸虫双价DNA疫苗保护力的比较
目的 寻求高效抗血吸虫感染的双价核酸疫苗.方法 以共表达和融合表达两种方式构建两种日本血吸虫双价核酸疫苗pVIVO2-mcs-Sj23/SjFABP、pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP,以鸡尾酒式混合获得混合双价疫苗(pVIVO2-mcs-Sj23/SjFABP与pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP).大量制备质粒,50只BALB/c小鼠随机分为5组:混合疫苗组、双价共表达疫苗pVIVO2-mcs-Sj23/SjFABP组、双价融合表达疫苗pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP组、空质粒对照组及生理盐水对照组.免疫后4周攻击感染,感染后45天剖杀,计数各组小鼠成虫数、肝虫卵数和免疫保力超过50%实验组的虫卵肉芽肿面积.结果 与对照组比较,实验组小鼠成虫数、虫卯数和虫卵肉芽肿面积有显著性差异(P＜0.05);融合表达组和共表达组无显著性差异(P＞0.05);混合DNA疫苗组免疫保护力优于单一双价组;与混合DNA疫苗组比较,pVIVO2-mcs-Sj23·SjFABP组的肝脏肉芽肿面积有显著性减小(P＞0.05).结论 血吸虫混合双价DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单一双价DNA疫苗.
