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前列腺素E2受体1亚型在转化生长因子β1诱导小鼠系膜细胞损伤中的作用机制
目的:探讨前列腺素E2受体1亚型(EP1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖、细胞外基质的影响及可能机制. 方法:体外原代培养MCs.采用脂质体LipofectamineTM 2000化学合成法将siRNA转染至MCs中沉默EP1受体,筛选干扰效率大的EP1-siRNA片段.实验分组:(1)正常对照组;(2) TGF-β1(10 ng/ml)组;(3) NC-siRNA+ TGF-β1(10 ng/ml)组;(4) EP1-siRNA+ TGF-β1(10 ng/ml)组;(5)EP1-siRNA组.ELISA法检测各组细胞上清中前列腺素E2(PGE2)的表达,实时荧光定量PCR方法检测各组细胞纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、环氧化酶2(COX2)、膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)mRNA的表达.Western blot法检测FN、CTGF、COX2、mPGES-1蛋白及p38MAPK、ERK活性的变化. 结果:与正常对照组相比,TGF-β1组FN、CTGF、COX2、mPGES-1的mRNA和蛋白的表达上调(P＜0.05);与TGF-β1组相比,EP1-siRNA+ TGF-β1组FN、CTGF、COX2、mPGES-1的mRNA和蛋白的表达下调(P＜0.05);TGF-β1刺激后,p38MAPK、ERK磷酸化水平明显增强(P＜0.05),EP1-siRNA+ TGF-β1组,p38MAPK、ERK磷酸化水平较对照组明显下调(P＜0.05). 结论:EP1-siRNA可能通过抑制ERK和p38MAPK磷酸化减轻TGF-β1诱导的小鼠系膜细胞损伤.
关键词： 前列腺素E2受体1亚型 siRNA 转化生长因子β1 系膜细胞 信号通路
