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ESC42文献资料
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重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定
目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料.方法:从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备;Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS-Fit软件查询NCBI数据库.结果:获得rhESC42融合蛋白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%,且符合率为100%.在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β-defensin家族,具有抗菌活性.结论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后的功能研究奠定基础.
