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麝香配伍乳香对大鼠前列腺上皮细胞紧密连接结构相关蛋白表达的影响
目的:探讨麝香-乳香配伍处理对正常及慢性前列腺炎模型大鼠前列腺上皮细胞紧密连接结构相关蛋白表达的影响. 方法:80只雄性SD大鼠随机分为8组:正常空白对照组、正常麝香-乳香组、正常麝香组、正常乳香组、模型空白组、模型麝香-乳香组、模型麝香组、模型乳香组.制备慢性前列腺炎大鼠模型,造模60 d时根据组别分别给予麝香0.021 g/(kg·d)、乳香1.05g/(kg·d)剂量灌胃,麝香-乳香组给予联合剂量,空白组给予生理盐水灌胃.各组别连续灌胃3d,处死大鼠,取前列腺组织,固定后以免疫组化法检测大鼠前列腺上皮屏障紧密连接功能相关蛋白紧密连接蛋白1、紧密连接蛋白3、闭锁蛋白、胞质附着蛋白1(ZO-1)的表达情况. 结果:在病理状态下,仅紧密连接蛋白1的表达增高有统计学意义.麝香、乳香处理后,在生理/病理状态下对4种蛋白的调节作用不同:生理状态下,单用麝香(824.6±393.3)、乳香(982.0 ±334.0)或配伍处理(1 088.1±640.2)均可大幅度增高紧密连接蛋白1的表达(P ＜0.05,P＜0.01);对于紧密连接蛋白3,单用乳香表达上调(1 009.5 ±243.6,P＜0.05),单用麝香(597.5 ±80.7)差异无统计学意义,配伍麝香(678.4 ±255.1)可降低乳香上调表达作用;单用麝香(693.0±424.8)、乳香(732.1 ±302.0)或配伍处理(560.2±202.3)对闭锁蛋白表达影响差异无统计学意义;单用麝香(290.0±166.8)、乳香(419.7±108.1)对ZO-1表达影响差异无统计学意义,配伍处理后表达明显下调(197.7 ±98.2,P＜0.05).慢性前列腺炎病理状态下,大鼠前列腺组织紧密连接蛋白1(823.0±100.1)、闭锁蛋白(1 160.0±32.2)表达显著增高(P＜0.01,P＜0.05);单用麝香(764.9±179.0)、乳香(468.4±220.4)或配伍(335.1 ±204.0)使用可下调紧密连接蛋白1表达(P＜0.05);单用麝香(700.1 ±223.7)或乳香(744.6 ±94.5)可上调紧密连接蛋白3表达(P＜0.05);单用麝香(749.6±321.7)、乳香(615.0±221.0)或配伍处理(505.8±523.7)均可下调闭锁蛋白表达;单用乳香可上调ZO-1表达(443.2±144.9),与麝香配伍处理后表达下调(213.5±24.9),与单用乳香组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:麝香、乳香对生理/病理状态下前列腺上皮屏障结构紧密连接相关蛋白的调节作用具有选择性和双向性,主要通过ZO-1蛋白的下调实现促通透性作用,而通过调节紧密连接蛋白1、紧密连接蛋白3、闭锁蛋白表达以维持结构稳定性.
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肝细胞癌组织中Claudin-3、MMP-2表达观察
目的 观察肝细胞癌(HCC)组织中紧密连接蛋白3(Claudin-3)、MMP-2的表达变化,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化法检测46例HCC组织及相应癌旁正常肝组织中的Claudin-3、MMP-2.分析Claudin-3、MMP-2表达与HCC临床病理参数的关系.通过GeneMANIA数据库分析Claudin-3、MMP-2基因之间的相互作用.结果 与癌旁正常肝组织相比,HCC组织中Claudin-3阳性表达率降低,MMP-2阳性表达率升高(P均<0.05).Ⅲ+Ⅳ期HCC组织中Claudin-3阳性表达率低于Ⅰ+Ⅱ期组织,MMP-2阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期组织(P均<0.05).HCC组织中Claudin-3、MMP-2表达呈负相关关系(r=-0.874,P<0.01).GeneMANIA数据库分析结果显示,Claudin-3、MMP-2基因之间有较多的物理相互作用,有一定程度的共表达、共定位现象.结论 HCC组织中Claudin-3阳性表达减少,MMP-2阳性表达增高,Claudin-3低表达、MMP-2过表达可能与HCC的发生、发展有关,且Claudin-3、MMP-2基因之间存在相互作用.
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表皮生长因子对Hela细胞紧密连接蛋白3表达的影响及其可能机制
目的 探讨表皮生长因子(EGF)对宫颈癌Hela细胞紧密连接蛋白3(Claudin-3)表达的影响及其可能机制.方法 培养Hela细胞至贴壁,接种至3组6孔板,分别进行如下处理:①以0.0、0.5、5.0、10.0及100.0 ng/ml EGF处理8 h,测评不同浓度EGF对Claudin-3蛋白及其信使RNA(mRNA)的影响;②培养基中加入10 ng/ml EGF,分别于培养0 min、10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h,测评Claudin-3蛋白及mRNA水平、EGF相关作用通路各蛋白磷酸化情况;③分别以EGF受体(EGFR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)、促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)阻断剂干预1 h,随后加入含EGF 10 ng/ml的培养基培养,测评Claudin-3蛋白及mRNA水平.结果 EGF对Hela细胞Claudin-3蛋白及mRNA的表达有促进作用,且10 ng/ml EGF的促进作用明显,该促进作用随EGF刺激时间的延长而增强.EGF刺激后,EGFR、蛋白激酶B(AKT)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p38、JNK均发生磷酸化,各阻断剂均能特异性阻断EGF诱导的上述磷酸化现象.阻断EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路均能有效抑制Claudin-3蛋白的表达.结论 EGF能够增加Hela细胞Claudin-3的表达,其机制可能涉及EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路.
