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姜黄挥发油联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响及机制
目的 探讨姜黄挥发油(TVO)联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)A431细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期A431细胞,用5、10、20、40、80 mg/L TVO处理,对照组用含有1％二甲基亚砜(DMSO)的DMEM高糖培养基处理,24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况.另取部分A431细胞,分为4组,分别用含1％ DMSO的DMEM高糖培养基(对照组)、40 mg/L TVO(TVO组)、10 mg/L顺铂(顺铂组)、40 mg/L TVO和10 mg/L顺铂(TVO+顺铂组)处理24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3、Caspase-9酶活性;Western印迹检测Caspase-3、P糖蛋白表达.结果 5、10、20、40、80 mg/L TVO作用A431细胞24 h,对细胞增殖抑制率分别是(12.83±6.4)％、(16.27±11.4)％、(21.61±9.1)％、(33.11±2.0)％和(46.00±3.3)％,与对照组(4.03±1.4)％比较差异均有统计学意义(P＜ 0.05);24 h时抑制50％细胞增殖的TVO浓度为(61.66±1.03) mg/L;TVO组、顺铂组及TVO+顺铂组细胞增殖抑制率显著上升,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),联合用药有协同作用,联合指数(CI)为1.366(P＜ 0.05).TVO组、顺铂组细胞均不同程度变圆并出现凋亡,TVO+顺铂组细胞明显减少,出现大量细胞碎片.TVO组、顺铂组及TVO+顺铂组细胞Caspase-3酶活性分别是1.117±0.095、1.381±0.089、1.520±0.115,Caspase-9酶活性分别是1.259±0.059、1.829±0.171、2.760±0.297,Caspase-3蛋白表达量分别是1.156±0.006、1.296±0.021、1.482±0.016,P糖蛋白表达量分别是1.311±0.011、1.169±0.012、0.528±0.014,其中TVO+顺铂组细胞Caspase-3、Caspase-9酶活性及Caspase-3蛋白表达量显著高于TVO组和顺铂组,P糖蛋白表达量显著低于TVO组和顺铂组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄挥发油与顺铂联用可协同抑制人皮肤鳞癌A431细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化Caspase系统并降低P糖蛋白表达相关.
