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酒精对小鼠NIT-1细胞氧化损伤及凋亡的影响
目的研究酒精能否诱导小鼠胰岛素瘤细胞(NIT-1)凋亡,初步探讨凋亡发生机制.方法体外培养的小鼠NIT-1细胞用不同浓度酒精处理后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察酒精对小鼠NIT-1细胞凋亡的影响;测定细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px,GPX)的活性以判断细胞氧化程度;采用比色法测定Caspase-3酶活性.结果酒精导致NIT-1细胞琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯状凋亡条带.与对照组比,剂量组MDA生成增多,SOD、GSH-Px活性下降,GSH含量下降.酒精作用后NIT-1细胞caspase-3活性升高,升高程度与作用时间及剂量有关.结论提示高浓度酒精可导致体外培养的小鼠NIT-1胰岛β细胞氧化抗氧化失衡,氧化应激诱导细胞发生凋亡,凋亡的发生很可能与Caspase-3激活有关.
关键词： 酒精 NIT-1细胞 氧化应激 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
诱导胃癌细胞凋亡中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的表达
目的研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-8)在维生素E琥珀酸酯(VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法以人胃癌SGC-7901细胞作为靶细胞,采用Western Blot法、荧光分光光度法、DAPI染色法探讨caspase-8在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中的表达和活性.结果经5 、10、20 mg/L VES处理后,细胞中caspase-8蛋白表达增加,caspase-8活性分别为(17.83±1.82)U和(33.74±2.65)U、(52.34±3.10)U,均呈剂量-效应关系;用caspase-8抑制剂z-异亮氨酸-谷氨酸-苏氨酸-天冬氨酸(IETD.fmk)处理SGC-7901细胞后,降低了VES诱导的细胞凋亡率及caspase-8的活性.结论 caspase-8是VES诱导SGC-7901细胞凋亡的重要参与者.
关键词： 胃肿瘤 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
左旋紫草素诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡
目的 探讨左旋紫草素诱导雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞凋亡的作用及其可能机制.方法 实验分为对照组(只加DMSO)、不同浓度的左旋紫草素组(2、4、8、16、32 μmol/L),作用PC3细胞24 h后收集细胞,应用MTT法检测各组细胞生长抑制率并计算左旋紫草素半数有效抑制浓度IC50.8μmol/L左旋紫草素作用PC3细胞0、6、12、24、48、72 h后收集细胞,用MTT法计算各时间点细胞生长抑制率.PC3细胞加入8μmol/L的左旋紫草素,分别培养0、12、24、48 h后收集细胞,流式细胞仪检测各时间点细胞凋亡率.8μmol/L浓度的左旋紫草素作用PC3细胞0、6、12、24、48、72 h后收集细胞,荧光分光光度计检测caspases3的活性.将PC3细胞分为对照组(DMSO)、z-DEVD-fmk(caspase3抑制剂,20 μmol/L)、z-IETD-fmk(caspase9抑制剂,20 μmol/L)和z-LEHD-fmk(caspase8抑制剂,20 μmol/L)组,各组加入抑制剂1h后加入左旋紫草素,24 h后收集细胞,MTT法计算各组细胞生长抑制率.结果 左旋紫草素能抑制PC3细胞的增殖,作用24 h后随浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐增加,IC50为(7.91 ±0.73) μmol/L.8μmol/L左旋紫草素作用PC3细胞0、6、12、24、48、72 h后,随着时间的延长,细胞生长抑制率逐渐升高.左旋紫草素8μmol/L作用12、24、48 h后,PC3细胞的凋亡率分别为(5.73±0.82)％、(19.15±1.14)％、(32.68±1.03)％,与0h时(0.98±0.34)％相比明显升高(均P＜0.05).左旋紫草素8 μmol/L作用PC3细胞后,caspase3活性6h时开始升高,在24 h达高峰,其后开始下降.caspase3、caspase9、caspase8抑制剂均可明显逆转左旋紫草素对PC3细胞增殖的抑制作用,与DMSO对照组比较,细胞生长抑制率由(50.63±0.99)％分别降至(25.30±0.58)％、(30.81±0.35)％、(39.64±1.19)％(均P＜0.05).结论 左旋紫草素能有效抑制PC3细胞的增殖,并诱导其凋亡,该作用可能通过激活caspase9线粒体通路为主.
关键词： 左旋紫草素 前列腺肿瘤 PC3细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
凋亡相关蛋白Caspase8在子宫内膜异位症改变中的意义
目的 研究在位及异位子宫内膜的Caspase 8表达,探讨Caspase 8在子宫内膜异位症(EMs)发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化法检测EMs组及非EMs组在位子宫及异位子宫内膜Caspase 8表达,比较两组结果.结果 两组标本均有Caspase 8表达,EMs组在位与异位内膜的表达值均低于对照,其中异位内膜的表达值低,差异有统计学意义(P<0.01);Caspase 8在对照组子宫内膜和EMs在位内膜的分泌期表达值高于增生期,其差异有统计学意义(P<0.01);异位内膜的表达值,增生期与分泌期相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Caspase 8在EMs在位及异位内膜低水平表达,介导细胞凋亡失调可能是影响EMs形成和发展的重要因素之一.
关键词： 子宫内膜异位症 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 免疫组织化学 -
肝细胞肝癌中环氧合酶-2与半胱氨酸蛋白酶-3的表达及意义
目的 探讨环氧合酶-2(Cox-2)与半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达和在HCC发生、发展中的作用及其关系.方法 应用组织芯片技术和免疫组化SP法检测112例HCC组织、72例癌旁组织和30例正常肝组织中Cox-2和Caspase-3的表达.结果 Cox-2在HCC组织(73.2%)和癌旁组织(65.3%)中的表达阳性率高于正常肝组织(20.0%),差异有统计学意义(P<0.01),与HCC组织分级有关(P<0.05).Caspase-3在HCC组织中的表达阳性率(35.7%)低于癌旁组织(77.8%)和正常肝组织(80.0%),差异均具有统计学意义(P<0.01).Caspase-3表达与HCC的组织分级和HBsAg表达显著相关(P<0.01,P<0.05).在112例HCC组织中Cox-2表达与Caspase-3表达呈负相关(r=-0.391,P<0.001).结论 HCC组织中Cox-2的高表达与Caspase-3的低表达在HCC的发生、发展过程中均可能起重要作用.乙型肝炎感染与Caspase-3的低表达的相关性及其可能机制有待进一步探讨.
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尿多酸肽通过调节caspase家族诱导多发性骨髓瘤细胞U266凋亡的实验研究
目的 探讨尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266增值及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法计算不同尿多酸肽浓度(1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg/g)对U266细胞生长的抑制率,Hoechst33258染色观察尿多酸肽作用后的细胞凋亡情况,Annexin-V/碘化丙啶(PI)检测尿多酸肽作用6、12、24 h后与对照组细胞(加细胞未加药物)的细胞凋亡率.使用Western-blotting法检测caspase 8、caspase 3及其激活物在U266细胞株经尿多酸肽(4 mg/g)作用6、12、24 h后的表达改变.结果 随着尿多酸肽浓度提高,U266细胞抑制率显著上升(F=17.276,P<0.001).经尿多酸肽作用后,Hoechst33258荧光染色提示细胞核浓集及出现凋亡小体.Annexin-V/PI分析显示,尿多酸肽处理6、12、24 h后细胞凋亡率显著高于对照组细胞[(5.53±0.28)％、(9.43±1.78)％、(21.50±2.45)％、(3.03±0.11)％,F=12.242,P<0.001].同时,随着尿多酸肽作用时间延长,pro-caspase 8、pro-caspase 3表达明显下降(F=18.241,P<0.001;F=4.924,P=0.005),而active-caspase 8、active-caspase 3表达明显上升(F=22.322,P<0.001;F=6.213,P=0.002).结论 尿多酸肽可抑制U266细胞增殖,且可能通过caspase凋亡途径在其中起主要作用.
关键词： 尿多酸肽 U266 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 多发性骨髓瘤 细胞凋亡 -
自由基清除剂MCI-186对高糖环境中内皮细胞凋亡的干预作用
观察内皮细胞在高糖环境及经肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导后的细胞凋亡情况,并加入自由基清除剂MCI-186予以干扰.检测细胞DNA裂解片段及凋亡信号蛋白(caspase)的表达量,以期探讨MCI-186对高糖环境中血管内皮细胞凋亡的干预作用及凋亡机制.发现高糖环境可增加内皮细胞凋亡率,并上调TNF-α诱导的调亡.MCI-186可抑制高糖诱导的细胞凋亡.但无法干预高糖环境中TNF-a诱导的凋亡.
关键词： 高糖 内皮细胞 自由基 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
支气管哮喘患者外周血炎性细胞凋亡的研究
目的观察支气管哮喘患者外周血嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞和中性粒细胞对地塞米松及孟鲁司特凋亡诱导作用的反应性,并探讨差异的分子机制.方法 18例支气管哮喘患者外周静脉血分离淋巴细胞、EOS和中性粒细胞,体外培养时分别加入地塞米松和孟鲁司特,流式细胞仪检测细胞凋亡率和Fas受体表达率,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)水平.结果 (1)凋亡率:体外培养时淋巴细胞、EOS和中性粒细胞的自发凋亡率分别为(6.9±0.7)%、(31±11)%、(32±30)%,地塞米松刺激后的凋亡率分别为(17.1±10.8)%、(44±22)%、(35±24)%,孟鲁司特刺激后的凋亡率分别为(22.5±17.6)%、(50±27)% 和(55±22)%,地塞米松和孟普司特组淋巴空白细胞和EOS凋亡率与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.01、0.05);而中性粒细胞与EOS比较,差异无显著性(P>0.05).(2)Fas表达率:淋巴细胞、EOS和中性粒细胞的Fas基础表达率分别为(1.50±0.07)%、(2.20±0.10)%和(1.21±0.09)%,地塞米松刺激后分别为(6.58±2.10)%、(7.52±3.20)% 和(3.24±2.34)%,孟鲁司特刺激后分别为(5.06±1.66)%、(7.45±2.63)%、(3.03±2.47)%,地塞米松和孟鲁司特组淋巴细胞、EOS Fas表达率与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.01、0.05),两组间Fas表达率比较差异无显著性(P>0.05),两组中性粒细胞与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);(3)caspase-3水平:淋巴细胞、EOS和中性粒细胞的细胞内caspase-3水平分别为(3.3±2.9)ng/L、(5±4)ng/L和(4.3±2.6)ng/L,地塞米松刺激后分别为(6.7±3.1)ng/L、(6±3)ng/L和(3.1±1.8)ng/L, 孟鲁司特刺激后分别为(5.2±3.7)ng/L、(8±4)ng/L和(3.1±2.0)ng/L,地塞米松组和孟鲁司特组EOS和淋巴细胞caspase-3水平与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.01、0.05),中性粒细胞caspase-3水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05),两组间比较差异无显著性(P>0.05);表明地塞米松和孟鲁司特均显著诱导淋巴细胞和EOS Fas受体的表达和细胞凋亡,二者也能诱导两种细胞内caspase-3活性增加.地塞米松不能诱导中性粒细胞凋亡,其Fas表达和caspase-3水平无显著改变.孟鲁司特可显著诱导中性粒细胞凋亡,但对Fas表达和caspase-3水平亦无显著影响.结论支气管哮喘患者的中性粒细胞对地塞米松和孟鲁司特凋亡诱导作用的反应性与淋巴细胞和EOS不同,可能与Fas和caspase-3途径的差异有关.
关键词： 哮喘 炎性细胞 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
番茄红素对过氧化氢诱导的小鼠来源神经瘤母细胞损伤的保护作用及机制研究
目的 观察番茄红素(LY)对过氧化氢(H2O2)诱导的神经瘤母(N2a)细胞损伤的保护作用及可能机制.方法 用H2O2处理小鼠来源N2a细胞6h,建立细胞氧化损伤模型.用LY预孵N2a细胞24 h后,加入100 μmol/LH2O2共同作用6h,以探讨LY的保护作用.实验分对照组、LY组、损伤组及保护组.采用MTT比色法测定N2a细胞活力；Hochest33258染色观察凋亡细胞形态；流式细胞仪测定N2a细胞凋亡率；Western blot法测定细胞质Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达.结果 与对照组比较,损伤组明显造成细胞损伤(P＜0.01),导致细胞凋亡,同时降低Bcl-2表达,增加Bax表达,Bcl-2/Bax比值显著降低,增加Caspase-3蛋白水平(P＜0.01).与损伤组比较,保护组予LY预处理后,N2a细胞活力明显增加(P＜0.01),凋亡细胞减少,Bcl-2/Bax比值增高,Caspase-3蛋白表达降低(P＜0.05).结论 LY能有效保护H2O2对N2a细胞的损伤,并通过提高Bcl-2/Bax比值,抑制Caspase-3 蛋白活化,发挥保护作用.
关键词： 过氧化氢 细胞凋亡 抗氧化剂 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 番茄红素 -
大鼠脑缺血预处理后脑组织胱天蛋白酶-3蛋白的表达
目的探讨胱天蛋白酶-3(caspase-3)在脑缺血预处理过程中的表达和意义.方法用免疫组织化学染色技术分别检测假手术对照组、缺血预处理对照组、缺血组和缺血预处理组大鼠脑组织石蜡切片中caspase-3蛋白的表达情况.结果缺血组和缺血预处理组CA1区caspase-3蛋白免疫反应强度明显高于假手术对照组;缺血预处理组再灌注48和72 h与再灌注时间相同的缺血组比较,caspase-3蛋白免疫反应强度差异有显著性意义.结论脑缺血预处理的保护机制可能与抑制caspase-3蛋白表达、减少脑细胞凋亡有关.
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蛋白酶的活化和bcl-2基因的表达对家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活化和bcl-2基因的动态表达对家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响.方法 42只家兔建立心肌缺血再灌注模型,随机分为对照组(6只)和实验组(36只).采用原位杂交、免疫组织化学技术等,观察家兔缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA、bcl-2 mRNA动态表达的变化规律对心肌细胞凋亡细胞的数目影响.结果 缺血再灌注损伤激发了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活化,促进了凋亡的发生,二者的曲线变化呈正相关(r=0.9286,P＜0.001).半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、bcl-2之间形成一种抗衡的网络调控构象,负责凋亡的促进和凋亡的抑制.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA、bcl-2 mRNA、细胞凋亡三者的表达,在交界区比梗死区更明显.结论 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA活化诱导的细胞凋亡是家兔缺血再灌注引起心肌细胞损伤的主要原因.交界区以凋亡为主要变化的动态演变,为临床治疗提供了一个时间窗.
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参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的相关研究
目的 探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关因子caspase-8、抗凋亡因子FLIP的蛋白及其mRNA表达的影响.方法 选择sD大鼠100只随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)、模型组(40只)和参芎注射液治疗组(干预组,40只),采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学及RT-PCR法分别检测caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达.结果 与正常组和假手术组比较,模型组大鼠各时间点凋亡细胞明显增加(P<0.01),caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05,P<0.01).与同时间点模型组比较,干预组大鼠凋亡细胞明显减少,easpase-8蛋白和mRNA表达明显减弱(P<0.05,P<0.01),FLIP蛋白和mRNA表达分别于再灌注6 h和12 h时间点明显增强(P<0.05).结论 参芎注射液能通过减弱caspase-8表达及增强FLIP表达,从而拮抗大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡.
关键词： 脑缺血 再灌注 细胞凋亡 参芎注射液 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路在大鼠高脂血症发生发展中的作用
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR) γ/Caspase-8/Caspase-3信号通路在大鼠高脂血症发生发展中的作用.方法 将健康雄性SD大鼠60只〔4周龄,体质量(110±10)g〕随机分为正常对照组、高脂饮食组、叶酸组、维生索B12组、叶酸+维生素B12组.适应性喂养1周后,叶酸组、维生索B12组、叶酸+维生素B12组分别腹腔注射叶酸(0.5 mg/d)、维生素B12 (0.05 mg/d)、叶酸(0.5mg/d)+维生素B12(0.05 mg/d),同时给予高脂饲料喂养；对照组腹腔注射0.9％NaCl溶液(0.5 ml/d)同时给予正常饲料喂养；高脂饮食组给予高脂饲料喂养.第17周末取腹主动脉利用反转录-聚合酶链反应检测各组PPARγ、Caspase-8和Caspase-3 mRNA的表达.结果 叶酸组、叶酸+维生素B12组腹主动脉的PPARγ mRNA水平高于高脂饮食组；Caspase-8、Caspase-3mRNA水平低于高脂饮食组(P＜0.05),且叶酸+维生素B12组较叶酸组降低mRNA水平更明显(P＜0.05).结论 叶酸与维生素B12可以改善血管壁PPARγ、Caspase-8和Caspase-3 mRNA的水平从而防止高脂血症对血管内皮的损伤.
关键词： 高脂血症 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 叶酸 -
成骨细胞中 Caspase 蛋白和 Bcl－2蛋白在绝经后骨质疏松症发病机理中的作用
目的：探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）－3、Caspase－9、B细胞淋巴瘤－2（Bcl－2）蛋白对绝经后骨质疏松症发病机理的影响。方法2012年1月至2012年12月期间收集广州医科大学附属第一医院老年病科住院的需行髋关节置换手术的女性绝经期患者20例，分为骨质疏松症组与对照组，每组各10例。术中取下股骨头或股骨颈中松质骨，分别进行成骨细胞的体外培养，通过酶联免疫吸附试验（ ELISA）方法检测两组患者成骨细胞中Caspase－3、Caspase－9、Bcl－2蛋白表达情况。两独立样本均数比较采用t检验，方差不齐的采用秩和检验。结果与正常对照组比较，骨质疏松症组患者的成骨细胞中Caspase－3（11．0±1．5 pmol／L）、Caspase－9（10．9±1．7 pmol／L）的表达水平均较高，差异均有统计学意义（Caspase－3：t＝5．76，P＜0．05；Caspase－9：t＝4．47，P＜0．05）；而骨质疏松症组患者的成骨细胞中Bcl－2（1．3±0．5 ng／ml）低于正常对照组，差异有统计学意义（ t＝2．43，P＜0．05）。结论在骨质疏松症的成骨细胞凋亡过程中，Caspase依赖性凋亡途径激活，而Bcl－2途径受到抑制，二者可能参与了绝境后骨质疏松症的发病机理。
关键词： 骨质疏松症 成骨细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 Bcl-2 蛋白 人 -
过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对前列腺上皮细胞作用的研究
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人类前列腺上皮细胞株RWPE-1的表达和对前列腺细胞凋亡过程的影响.方法 用免疫细胞化学和免疫荧光法检测PPARγ在RWPE-1细胞的表达.细胞分对照组和实验组,实验组细胞采用PPARγ激动剂罗格列酮处理,分别检测2组细胞中凋亡执行酶Caspase 3/7的活性,采用免疫细胞化学方法检测Bax表达,采用阳离子染料JC-1观察线粒体膜电位变化.采用SPSS 13.0软件对实验数据进行统计分析,组间均数比较采用独立样本t检验,α=0.05.结果 PPARγ在人类前列腺上皮细胞株RWPE-1表达,主要定位于细胞核和核周.实验组Caspase 3/7活性[(10 636±1032)RLU]明显高于对照组[(5936±620)RLU],差异有统计学意义(P＜0.01).实验组Bax表达显著增加,对照组累计吸光度(A)值为6017±563,实验组为8250±694,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).线粒体膜电位检查发现,对照组呈黄绿色荧光,实验组呈绿色荧光,表明实验组线粒体膜电位发生去极化改变.结论 PPARγ激动剂能够诱导前列腺上皮细胞凋亡,这一过程涉及Bax和线粒体膜电位改变,提示PPARγ可能通过调控前列腺细胞的凋亡过程参与BPH发病.
关键词： 前列腺增生 细胞系 PPARγ 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 罗格列酮 -
肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究
目的 观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组和IRI组各6只,转染空质粒组和转染AM质粒组各10只.大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率.转染成功后夹闭左肾动脉45 min制作肾IRI模型,于再灌注24 h后留取肾组织标本.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达,蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达.结果 转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组(0.51±0.09和0.23±0.05,P＜0.05).与假手术组相比,IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[(38.79±7.52)%和(2.89±0.52)%,P＜0.05];肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调,分别为0.72±0.18和0.23±0.04、0.80±0.12和0.38±0.06、1.24±0.25和0.39±0.09、0.76±0.13和0.38±0.08、0.92±0.14和0.32±0.06、0.89±0.12和0.42±0.09(P＜0.05),Bax/Bcl-2升高(0.91±0.18和0.61±0.08,P＜0.05).转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调,分别为(19.36±6.78)%、0.48±0.11、0.62±0.07、0.53±0.08、0.46±0.08、0.51±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2表达进一步上调为1.23±0.25,Bax/Bcl-2降低为0.44±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染空质粒组和IRI组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的.
关键词： 肾上腺髓质素 再灌注损伤 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
落新妇苷通过下调 caspase-3、－8、－9蛋白的表达来减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤
目的：探讨落新妇苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法 SD大鼠，分为Sham 组（假手术组）、HIRI组（缺血再灌注组）、落新妇苷（低剂量组、中剂量组、高剂量组），建立大鼠肝脏缺血再灌注模型，分别于再灌注4h、8h、16h后取血液及肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶（ ALT）、谷草转氨酶（ AST）；光镜下观察肝细胞显微结构变化；免疫印迹试验（ Western Blot ）分析肝组织中IL-1、caspase-3、－8、－9的表达；流式细胞仪检测肝细胞凋亡率。应用SPSS l5．0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（ x珋±s）表示，对各组大鼠血清ALT、AST，肝组织中IL-1、caspase-3、－8、－9蛋白的表达及细胞凋亡情况进行比较采用单因素方差分析和t检验，以P＜0．05、 P＜0．01为差异有统计学意义。结果 HIRI 组ALT和AST水平升高，而药物组明显降低。光镜结果显示药物组肝细胞损伤明显减轻。 Western Blot结果显示，高剂量组IL-1、caspase-3、－8、－9蛋白的表达较HIRI组明显减轻。高剂量组的细胞凋亡率也较HIRI 组降低。结论落新妇苷预处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤，其作用机制可能与其抑制caspase-3、－8、－9的表达，从而抑制细胞凋亡有关。
关键词： 落新妇 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 肝 再灌注损伤 动物实验 -
热疗诱导人肝癌细胞 HepG2凋亡及机制的研究
目的：探讨不同温度热疗对人肝癌细胞HepG2的凋亡作用。方法人肝癌HepG2细胞常规方法培养，采用水浴加热法对实验组（41℃，42℃，43℃）和对照组（37℃）细胞进行加温（0．5 h）处理，处理后继续培养24 h。采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况，免疫组织化学技术检测细胞凋亡相关蛋白P53的水平，实时荧光定量PCR法检测热疗作用后生存素（ Survivin）， caspase-9基因mRNA的表达变化。应用SPSS16．0软件进行统计学分析。凋亡率、P53蛋白值、caspase-9 mRNA表达水平等计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用t检验或方差分析。P＜0．05差异有统计学意义。结果在37℃，41℃，42℃，43℃，细胞凋亡率分别为（9．58±1．22）％、（16．47±3．41）％、（20．07±1．85）％和（23．42±1．93）％； P53蛋白表达 OD 值分别为（0．083±0．015）、（0．145±0．024）、（0．267±0．031）、（0．389±0．019）。与对照组比较，survivin基因mRNA的表达量下降（P＜0．05），caspase-9基因mRNA的表达显著增加（P＜0．05）。不同温度热疗后，随着加热温度的增高，细胞凋亡率增加，促进了基因p53及caspase-9的表达，凋亡抑制基因survivin的表达量下降。结论通过热疗可以增加p53及caspase-9基因的表达，抑制survivin 基因的表达，从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡。
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水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系(Anip973)细胞凋亡的分子机制研究
目的 探讨水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系Anip973细胞凋亡的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测、流式细胞仪(FCM)技术检测、DNA Ladder分析、PARP的表达分析以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达活性分析.结果 水飞蓟素对人高转移表型肺癌细胞系Anip973细胞的增殖有显著抑制作用.随着浓度的增加,倒置显微镜下可见细胞数目减少,胞体变小、变圆,到高浓度时出现较多的死亡细胞.扫描电镜观察发现,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征.流式细胞仪检测显示G1期细胞比例增多,S期细胞明显减少,G2期细胞略有减少,并出现明显的凋亡峰.水飞蓟素作用后的Anip973细胞出现明显的DNA Lad-der和PARP降解增加等凋亡特征.凋亡相关蛋白Bax表达增加、caspase-3和caspase-9酶活性增加,而Bd-2表达降低.结论 水飞蓟素可以在体外抑制人肺腺癌细胞Anip973的增殖作用,并通过激活线粒体依赖的caspase凋亡通路,诱导其凋亡.
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胎盘组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1和凋亡相关基因的表达与子痫前期发病的关系
目的 探讨胎盘组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)和凋亡相关基因easpase-3、Bax及bcl-2的表达及其与子痫前期发病的关系.方法 选择2005年6月-2006年12月在中国医科大学附属盛京医院产科住院的子痫前期患者30例(子痫前期组),以同期正常孕妇40例为对照组.采用免疫组化、RT.PCR技术和蛋白印迹(western-blot)法检测两组孕妇不同孕周胎盘组织中LOX-1和caspase-3、Bax及bel-2的表达.结果 (1)子痫前期组20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1-32周、32周+1～36周、36周+1～40周孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为20.1±1.8、25.6±1.3、32.8±1.6、34.3±1.5、39.9±1.2,对照组分别为11.2±0.6、18.5±1.6、26.1±1.8、28.3±1.6、32.3±1.6,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);子痫前期组孕妇胎盘组织中easpase-3蛋白表达水平分别为12.3±0.9、16.3 4-0.9、24.4±0.8、28.3±0.5、36.3±1.1,对照组分别为8.5±1.0、12.3±1.1、17.4±1.2、20.4±0.5、24.2±1.3,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)子痫前期组不同孕周孕妇胎盘组织中LOX-1、easpase-3及Bax mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);bel-2 mRNA和蛋白的表达趋势与Bax表达结果相反.结论 LOX-1和caspase-3、Bax在子痫前期患者胎盘组织中表达上调,bcl-2表达下调,-与子痫前期发病有关.
关键词： 先兆子痫 胎盘 清道夫受体 E类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 原癌基因蛋白质c-bcl-2 细胞凋亡
