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地塞米松影响下颌骨再生修复的相关分子机制研究
目的 探讨抗炎药地塞米松延缓下颌骨缺损骨再生的相关分子机制.方法 建立SD大鼠双侧下颌骨颊舌向贯穿的骨缺损模型,随机分为用药组与生理盐水对照组,分别给予治疗剂量的地塞米松或者等体积的生理盐水,连续给药5 d后的第1、3、6、10、17天分别处死大鼠并取双侧下颌骨,用免疫组化染色,分别检测骨再生修复不同阶段炎症因子环氧化酶-2(COX2)、成骨分化关键性调控因子runt相关转录因子-2(RUNX2)及骨钙蛋白(BGP)的表达.结果 炎症因子COX2及成骨因子RUNX2、BGP在骨再生修复过程中的表达存在相同的变化趋势,半定量数据表明RUNX2、BGP表达和COX2表达存在正相关关系.结论 抗炎药地塞米松通过抑制炎症阶段COX2表达,从而抑制成骨分化关键性调控因子RUNX2/BGP表达,导致下颌骨缺损再生修复的延迟.
关键词： 骨再生 地塞米松 环氧化酶-2 Runt相关转录因子-2 SD大鼠 -
碱性环境对慢性肾衰竭大鼠血管钙化的影响
目的:探讨碱性环境对慢性肾衰竭大鼠血管钙化的影响及可能机制.方法:将21只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(甲基纤维素灌胃)、慢性肾衰竭组(甲基纤维素灌胃)、钙化组(甲基纤维素加骨化三醇灌胃)、碱干预组(甲基纤维素及骨化三醇灌胃及5％碳酸氢钠腹腔注射).采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测大鼠胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉Runx2表达.体外采用组织块贴壁法培养原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞,利用10 mmol/L β-甘油磷酸钠制备血管平滑肌细胞钙化模型.使用HC1和NaHCO3调节培养基pH值.细胞随机分为3组:正常对照组(pH 7.4)、钙化组(10 mmol/L p-甘油磷酸钠+pH7.4)、碱干预组(10 mmol/L β-甘油磷酸钠+pH 7.7),共培养12d.采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,RT-PCR和Western Blot法检测Runt相关转录因子-2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达.结果:体内实验中,成功制备了慢性肾衰竭血管钙化的大鼠模型,与钙化组相比,给予碳酸氢钠干预后,大鼠血管钙盐沉积均明显增加(P＜0.05);免疫组织化学结果显示碱性环境可明显升高Runx2表达(P＜0.05).体外实验中,与正常对照组相比,钙化组钙盐沉积明显增加(P＜0.05);与钙化组相比,碱干预组钙盐沉积明显增加(P＜0.05).RT-PCR和Western Blot显示,与正常对照组相比,钙化组Runx2表达明显增加(P＜0.05);与钙化组相比,碱干预组Runx2表达明显增加(P＜0.05).结论:碱性环境可能通过促进类骨表型转化进而促进慢性肾衰竭大鼠血管钙化.
关键词： 碱性环境 慢性肾衰竭 血管平滑肌细胞 钙化 Runt相关转录因子-2 -
体外双轴拉伸应变诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨特异性标志物的表达
探讨体外双轴拉伸应变对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向成骨细胞分化的影响.分离4周龄SD大鼠BMSCs,将P3～ P4代rBMSCs接种于DMEM-LG完全培养基的双轴拉伸应变细胞培养小室中.当细胞生长至亚融合状态后,给予细胞施加拉伸应变,频率为1 Hz,应变幅度为1％、2％、5％,每个应变幅度均分别加载2 h/d、4 h/d、6 h/d,连续作用3d.以未受拉伸应变的rBMSCs为空白对照组.以未受拉伸应变,含100 nmol/L雌二醇(E2)培养的rBMSCs为阳性对照组.通过实时荧光定量PCR和Western blot方法检测各组rBMSCs的碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Runt相关转录因子-2(Runx2)、骨钙蛋白(OCN)mRNA和蛋白的表达量.实验结果表明:(1)E2组rBMSCs中Runx2、Col Ⅰ、ALP、OCN mRNA及蛋白表达量均明显高于空白对照组(P＜0.05);(2)1％拉伸应变组rBMSCs中ALP、Runx2 mRNA和蛋白表达量均明显高于空白对照组(P＜0.05),但与E2组相比明显降低(P＜0.05);(3)2％拉伸应变组rBMSCs中ALP、Col Ⅰ、Runx2、OCN mRNA和蛋白表达量均明显高于空白对照组(P＜0.05),其中,加载时间4 h/d组rBMSCs中Col Ⅰ、Runx2 mRNA和蛋白表达量明显高于E2组(P＜0.05);(4)5％拉伸应变组,加载时间2 h/d、4 h/d组rBMSCs中ALP、Col Ⅰ、Runx2 mRNA和蛋白表达量均明显高于空白对照组(P＜0.05),与E2组相比,加载时间4 h/d组的ColⅠ、Runx2 mRNA和蛋白表达量也明显上调(P＜0.05).本实验结果提示,雌二醇和体外双轴拉伸应变均可以诱导rBMSCs向成骨细胞分化,且拉伸应变幅度2％、加载时间4 h/d时,促rBMSCs成骨分化的作用强.
关键词： 大鼠骨髓间充质干细胞 拉伸应变 Ⅰ型胶原 Runt相关转录因子-2 骨钙蛋白
