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海胆黄多糖SEP纯化工艺的研究
为了规模化制备具有抗肿瘤活性的海胆黄多糖(SEP),简化纯化步骤和提高多糖收率,在原有分离纯化方法的基础上,结合超滤技术,对SEP的纯化工艺进行了优化.采用木瓜蛋白酶-Sevag联用法,以超滤法替代减压浓缩和透析去除杂质,优化酶法提取条件和超滤参数.研究结果表明:用0.6％的木瓜蛋白酶在pH 6.5、60℃酶解5h,可去除18.3％的蛋白质,3次Sevag法后,蛋白质去除率达71.7％,多糖回收率80.1％.采用截留相对分子质量100 k的膜超滤浓缩,压力0.05 MPa,原液质量浓度1.2 mg/mL,浓缩3倍时的多糖截留率为84.0％.各步骤多糖累计回收率为67.3％,该纯化工艺可获得高产率高纯度的SEP,为规模化制备SEP奠定了基础.
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荧光标记法测定大鼠血浆中海胆黄多糖研究
通过FITC荧光标记海胆黄多糖SEP,研究大鼠尾静脉注射给药SEP的血浆代谢.结果表明,荧光标记的海胆黄多糖SEP-Tyr-FITC纯度可达99％.与空白对照组及SEP组相比,SEP-Tyr-FITC组小鼠脾细胞增殖无显著差异.其在大鼠体内的血浆清除半衰期为0.24 h,消除速率常数(Ke)为2.867,给药后的大血药浓度(cmax)为860 μg/mL,消除半衰期(t1/2)为0.24 h,药-时曲线下面积(AUCt)为366.4 h·μg/mL.所用方法的定量下限为0.02 mg/mL,标准曲线线性范围为0.02～ 1.0 mg/mL.低定量限(LLOQ)、低、中、高4个浓度批内变异系数和批间变异系数均小于15％,相对回收率均在85％～ 115％之间.同时,各浓度SEP血浆样品处理前或处理后室温放置6h、-20℃冷冻融解1次稳定性良好,相对标准偏差均小于10％.
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海胆黄多糖SEP的制备及其抗肿瘤作用研究
建立荷瘤小鼠模型,以不同剂量的SEP经腹腔注射给药后检测荷瘤小鼠的肿瘤生长情况、脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖和抗氧化酶活性研究海胆黄多糖SEP的抗肿瘤活性.结果:SEP高、中、低3个剂量组均可显著抑制S180实体瘤的生长,其抑瘤率分别为46.9%、41.7%和40.7%;SEP能显著提高荷瘤小鼠的脾指数和胸腺指数,明显促进脾淋巴细胞的增殖,显著降低小鼠血清中丙二醛含量和提高超氧化物歧化酶活性.结论:SEP具有明显的抗肿瘤活性,其作用可能是通过免疫调节和抗氧化作用实现的.
