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Eg5抑制剂体外高通量筛选
建立筛选小分子新型抗肿瘤药物Eg5抑制剂的方法.提取HL60细胞总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,构建原核表达质粒并转化大肠杆菌诱导表达蛋白.通过两步离子交换层析纯化蛋白,对小分子化合物库里的300个化合物进行筛选.MTT法以及免疫组化用于分析化合物的抑制肿瘤细胞增殖作用的机制.测序证实克隆得到的hEg5序列完全正确,SDS-PAGE检测与预测的分子量完全吻合.对小分子化合物库的筛选结果显示有12个小分子能抑制Eg5的活力,这些分子比阳性药物monastrol抑制活力要好,比阳性药物CK0106023的抑制活力稍差,它们能抑制肿瘤细胞的增殖生长.CPUYL064和CPUYL001能在分裂的细胞中引发monastral spindle的现象.这些Eg5抑制剂很有可能在未来临床上发展成为新一代的抗肿瘤药物.
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敲低PTEN表达对纺锤体正常结构的破坏作用及其相关机制研究
目的 探讨PTEN干扰对有丝分裂纺锤体形成的影响及其可能机制.方法 用慢病毒干扰载体及阴性对照载体转染HeLa细胞后采用qPCR及Western blot技术检测PTEN mRNA及蛋白表达水平,有丝分裂测定实验镜下观察细胞有丝分裂指数,免疫荧光染色技术观察纺锤体的形态、结构,Western blot实验检测Eg5蛋白表达变化.结果 PTEN shRNA转染HeLa细胞后,PTEN的mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P＜0.05);与对照组相比,shPTEN组细胞的有丝分裂指数明显上调(P＜0.01);免疫荧光结果显示shControl组中可见正常的纺锤体形成,而shPTEN组中可见形态及结构异常的纺锤体,且纺锤体的长度显著小于对照组(P＜0.01);驱动蛋白Eg5在shPTEN组中表达明显低于对照组(P＜0.05).结论 PTEN干扰可能通过下调Eg5蛋白的表达水平导致有丝分裂及纺锤体形成异常.
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驱动蛋白Eg5研究进展
驱动蛋白Eg5（kinesin-5），又名驱动蛋白超家簇成员11（kinesin fanmily member11，kif11），定位于纺锤体微管，参与中心体的分离和双极纺锤体的形成。在多种肿瘤细胞中Eg5高表达，并与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。检测Eg5对肿瘤的早诊早治、判断肿瘤转移及预后具有着重要意义。鉴于Eg5在有丝分裂中的特性，作为肿瘤治疗的靶点受到广泛关注，众多Eg5抑制剂正不断研发。
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肺癌中Eg5、Ki-67的表达及临床意义
目的 观察Eg5、Ki-67在肺癌中的表达及与临床病理特征的关系,探讨两者与肺癌预后的关系.方法 采用免疫组化法检测79例肺癌组织、20例肺良性病变组织中Eg5、Ki-67蛋白表达,分析两者表达与临床病理特征的关系;并随访患者生存期,采用Kaplan-Maier生存分析和Cox回归法分析Eg5、Ki-67在肺癌组织中表达和预后的关系.结果 Eg5在肺癌组织中的阳性率为65.8％,Ki-67在肺癌组织中的强阳性率为48.1％,Eg5、Ki-67表达均与患者临床分期、淋巴结转移明显相关.Kaplan-Maier生存分析提示Eg5阳性、淋巴结转移和中晚期的肺癌患者预后较差(P＜0.05);Cox多因素回归分析显示临床分期、淋巴结转移是影响肺癌患者预后的独立危险因素,Eg5表达与淋巴结转移明显相关(r=0.539,P＜0.05).结论 Eg5蛋白在肺癌组织中呈阳性表达;Eg5、Ki-67蛋白高表达与淋巴结转移密切相关,Eg5阳性提示肺癌患者预后不良.
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EG5和BCR/ABL在慢性粒细胞白血病中表达及其临床意义
目的 观察驱动蛋白EG5 mRNA在正常人外周血和骨髓中的表达情况,探讨其在各期慢性粒细胞白血病(CML)中的表达及与BCR/ABL mRNA表达的相关性,评估EG5 mRNA在CML诊断和预后分析中的应用价值.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EG5 mRNA和筑巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)检测BCR/ABL mRNA,分别对8例正常人外周血及骨髓样本和62例CML患者的外周血样本进行检测.结果 正常外周血标本中未检测到EG5的表达,正常骨髓标本中可见EG5的低丰度表达;EG5辅助诊断CML的敏感度和特异性分别为89.6%(26/29)和84.8%(28/33);BCR/ABL 融合基因诊断CML的敏感度和特异性分别为96.5%(28/29)和90.9%(30/33);CML中EG5和BCR/ABL表达的差异无统计学意义,且两者之间呈高度正相关.结论 EG5和BCR/ABL在慢性粒细胞白血病疾病进展中的表达情况基本一致,EG5和BCR/ABL的联合检测及动态观察,可作为CML临床辅助诊断、疗效和预后判断的指标之一.
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RT-PCR驱动蛋白Eg5在肝细胞癌中的表达及其意义
目的 检测驱动蛋白Eg5在肝细胞癌中的表达水平,并探讨其与肝癌转移的关系.方法 选取53例原发性肝癌的手术切除标本和5例正常肝脏组织,采用免疫组化检测Eg5的表达,并分析其与肝癌临床病理特征和肝癌转移间的关系;RT-PCR检测Eg5 mRNA在有门脉癌栓、无门脉癌栓、炎性假瘤的肝脏组织中的表达.结果 免疫组化显示Eg5在正常肝脏组织中未见明显表达,在肝癌组织中的表达阳性率为62.3%(33/53),且与肝癌的肿瘤直径(χ2=10.162,P=0.002)、Edmondson分级(χ2=4.414,P=0.038)、pTNM分期(χ2=13.061,P=0.000)、有无门脉癌栓(χ2=4.098,P=0.041)有关;而与患者性别、年龄、肿瘤包膜有无等指标无明显的相关性.RT-PCR显示Eg5 mRNA在炎性假瘤的肝脏组织中未见表达,在无门脉癌栓的肝癌组织、有门脉癌栓的肝癌组织中表达水平为0.647±0.028、0.933±0.017,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Eg5在正常肝脏组织中未见明显表达,而高表达于肝癌组织中,Eg5的表达与肝癌转移特性有关,Eg5可能作为肝癌化学治疗的潜在靶点.
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TRAF4及其相关蛋白Eg5与肿瘤的关系
肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor associated factor,TRAF)是一类细胞内重要的信号转导蛋白,它参与调节多种信号转导通路的激活,调节正常和肿瘤细胞的增殖、存活、凋亡、参与炎症反应.迄今已发现7种不同的TRAF,TRAF4是其中特殊的一员.通过对TRAF4结构功能的介绍,发现TRAF4的过表达可能与肿瘤形成有关.TRAF4的相关蛋白Eg5是驱动蛋白家族成员之一,它在增殖组织细胞中高表达,定位于有丝分裂期的微管,主要与细胞分裂中染色体的定位、中心体的分离以及双极纺锤体的形成和分离有关.通过对Eg5结构功能的介绍,探究其与TRAF4的相互作用以及与肿瘤形成的关系.
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驱动蛋白E g5在非小细胞肺癌中的表达及其意义
目的：检测驱动蛋白Eg5在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达水平，并探讨其与非小细胞肺癌转移的关系。方法：选取63例非小细胞肺癌的手术切除标本和20例正常肺脏组织标本，采用免疫组化检测Eg5的表达，并分析其与非小细胞肺癌临床病理特征和转移之间的关系。结果：E g5在正常肺组织中未见明显表达，在非小细胞肺癌组织中的表达阳性率为68．3％（43／63），且与非小细胞肺癌的肿瘤直径（χ2＝4．506，P＝0．034）、临床分期（χ2＝8．866，P＝0．012）、淋巴结转移情况（χ2＝19．52，P＜0．001）有关，差异有统计学意义；而与患者性别、年龄、分化程度等指标无明显的相关性（P＞0．05）。结论：Eg5在正常肺组织中未见明显表达，在非小细胞肺癌组织中高表达，E g5的表达与非小细胞肺癌临床分期及转移有关，E g5可预测非小细胞肺癌的淋巴结转移情况，可能作为非小细胞肺癌化学治疗的潜在靶点。
