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构建携带hIL-10基因的腺病毒载体及其对大鼠肝细胞损伤的保护作用
目的:构建携带人白细胞介素(human interleukin,hIL)-10基因的腺病毒载体,细胞学及动物模型实验鉴定其介导的目的基因表达,并验证其对大鼠肝细胞损伤的保护作用.方法:以pORF-hIL10质粒为模板,PCR扩增hIL-10基因,插入腺病毒质粒pDC315,构建pDC315-hIL10.将质粒pDC315-hIL10与腺病毒包装质粒共转染至293细胞,产生复制缺陷型重组腺病毒Ad5-hIL10;感染大鼠肝细胞,免疫学方法鉴定目的基因的表达;建立体内外大鼠肝细胞损伤模型,验证Ad5-hIL10对肝细胞损伤的保护作用.结果:经PCR扩增、鉴定,证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL10.大鼠肝细胞感染Ad5-hIL10后,随着病毒感染强度的升高,hIL-10表达明显上升.大鼠肝细胞体外培养模型预先感染病毒Ad5-hIL10,经四氯化碳诱导损伤,则细胞存活率随感染强度(multiplicity of infection,MOI)值升高而增加.至MOI=50时,细胞存活率恢复至92％；大鼠体内肝损伤模型显示,与损伤对照组和空白病毒对照组比较,Ad5-hIL10处理的大鼠肝细胞水样变性和间质炎症反应均减轻,肝功能的各项指标均有明显改善(P＜0.05).结论:成功构建了重组腺病毒质粒Ad5-hIL10,且能明显提高肝细胞的存活能力,对肝功能有明显保护作用.
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MEGX试验对大鼠肝损伤时肝贮备功能的评估
目的观察单乙基甘胺酰二甲苯胺(MEGX)试验在大鼠肝损伤模型不同阶段的检测结果,以探讨MEGX试验对肝功能评估的价值.方法 30只健康SD大鼠随机分成对照组和实验组,实验组以60%四氯化碳橄榄油皮下注射制作急性、慢性肝损伤模型.分别在2周和5周后行MEGX试验、常规肝功能试验和组织学检查并对比.结果正常组MEGX试验数据(x-)为193.40 ng/ml,急性肝损伤组为86.92 ng/ml,慢性肝损伤组为135.26 ng/ml,与肝组织学变化较符合.而常规肝功能试验在急性、慢性肝损伤时均异常,但变化幅度与组织学变化不符合.结论MEGX试验与肝组织学变化更符合.
