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人神经菌毛素1b结构域文献资料
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人神经菌毛素1b结构域单克隆抗体的制备及其抑制血管生成作用
目的:制备抗人神经菌毛素1(human neuropilin 1,HuNRP1)b结构域单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAb),为靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料.方法:运用杂交瘤技术,将HuNRP 1 b结构域重组蛋白(TF-HuNRP1b)免疫BALB/c鼠,共免疫3次,取免疫鼠的脾脏细胞与sp2/0细胞进行融合,采用间接免疫荧光法(immunofluorescent assay,IFA)筛选稳定分泌抗HuNRP1bmA,以Western blot 、IFA、流式细胞术分析mAb的特异性.以MTT法及小室迁移实验分析mAb抑制血管生成的能力.结果:获得1株稳定分泌抗HuNRP1bmAb的细胞株4F11.Western blot结果表明,本研究所获得的mAb 4F11只与重组HuNRP1b发生反应,与对照蛋白不发生反应;IFA及流式细胞分析结果表明,所获得的mAb能够识别肿瘤细胞MDA-MB-231、HepG2以及人脐静脉内皮细胞表达的天然HuNRP1蛋白;MTT法及小室迁移实验表明,所获得的mAb 4F11具有抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的能力.结论:成功制备出抗HuNRP1b的mAb,该mAb的获得将为进一步研究HuNRP1的功能及靶向抑制肿瘤血管生成提供生物材料.
关键词： 人神经菌毛素1b结构域 单克隆抗体 血管生成
