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不同肿瘤细胞株N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的差异表达
O-聚糖在肿瘤细胞中其结构会发生异常,并与癌细胞的表型及生物学特性密切相关[1].多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAcT2)催化O-聚糖合成的第一步.本文研究其在不同肿瘤细中的差异表达,以探索其在肿瘤发生、发展中的作用.
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α1,3GT siRNA打靶杂合子猪肝细胞阴性表达半乳糖转移酶
目的研究联合应用基因敲除及RNA干扰(siRNA)技术对猪α 1,3半乳糖转移酶(α 1,3GT)基因修饰后,阳性猪杂合子(+/)肝细胞的G T基因是否获得有效沉默并影响人天然抗体介导的细胞毒性作用.方法用pPNTloxPneo和pMXSV/U6载体构建猪GT基因敲除并siRNA载体,转染中国实验用小型猪的肝细胞,筛选获取杂合子克隆(+/).Northern blot检测GT mRNA表达,四甲基偶氮唑盐方法评估天然抗体细胞毒性.结果野生型和pPNTloxPGT转染的杂合子猪肝细胞的mRNA表达阳性,而pPNTloxPGTsiRNA载体转染的杂合猪肝细胞阴性表达α 1,3 GT mRNA;pPNTloxPGT转染细胞(+/-)和野生型(+/+)猪肝细胞对人天然抗体介导的细胞毒性实验敏感,而pPNTloxPGTsiRNA转染细胞(+/-)则对毒性试验敏感性明显下降,只检测到17%细胞毒性.结论对猪GT联合应用基因敲除及siRNA能够在阳性猪杂合子肝细胞内有效沉默G T基因,降低猪肝细胞对人天然抗体细胞毒的敏感性.
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003.去除α1,3-半乳糖转移酶的猪红细胞用于人类输血的研究
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糖基化恢复冷藏血小板的存活率
血小板冷藏会使血管假性血友病因子受体复合物(von Willebrand factor receptor complex)聚集成簇.巨噬细胞αMβ2整合素结合在成簇复合物的GPIbα亚基,导致输注的冷藏血小板被快速清除.因此输注用血小板不能冷藏,但现在的室温保存方式也存在很大缺点.我们已证明αMβ2是一种凝集素,它能识别GPIbα的N-连接葡聚糖上暴露的β-N-乙酰葡萄胺.冷藏血小板的酶促半乳糖苷化阻止了αMβ2的这种识别,延长了有功能的冷藏血小板的循环时间.当加入二磷酸尿苷半乳糖(UDP-半乳糖),血小板相关性半乳糖转移酶能有效地促进半乳糖苷化过程,这提供了一个强大而又简单的冷藏条件下保存血小板的方法.