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Gadd45g基因对垂体瘤AtT-20细胞的增殖、凋亡和自噬的影响
目的 探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响.方法 构建 Gadd45g 基因的CDS区序列克隆至真核表达质粒 p3XFLAG-Gadd45g及其shRNA真核表达质粒pLKO .1-sh-Gadd45g ,将p3XFLAG-Gadd45g转染至小鼠垂体瘤AtT-20细胞中.其shRNA真核表达质粒pLKO .1-puro-sh-Gadd45g进行慢病毒包装,病毒感染小鼠星形胶质细胞;Western blot检测FLAG-Gadd45g融合蛋白的表达及RT-PCR检测shRNA沉默效率,CCK-8检测细胞增殖活力 ,Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白的影响.结果 Gadd45g及其特异性shRNA真核表达质粒构建成功.构建的p3XFLAG-Gadd45g质粒在垂体瘤AtT-20细胞中能够表达;Gadd45g shRNA具有沉默效率.在垂体瘤AtT-20细胞中过表达Gadd45g ,可明显抑制细胞增殖 ,并能诱导Caspase-3表达,降低Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P＜0 .05).与之相反,在原代培养的星形胶质细胞中,shRNA干扰Gadd45g表达,可促进细胞增殖,并降低Caspase-3表达,而增加Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P＜0 .05).结论 垂体瘤中Gadd45g的表达缺失可能使得垂体瘤A t T-20细胞凋亡受阻及自噬作用增强 ,从而促进垂体瘤的发生、发展.恢复垂体瘤细胞中Gadd45g的表达及抑制垂体瘤细胞自噬作用有望成为垂体瘤治疗的新方法.
关键词： 生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g 垂体瘤 -
垂体瘤病灶内LRlG1、Gadd45g表达量与肿瘤细胞自噬、凋亡、侵袭的相关性研究
目的:研究垂体瘤病灶内LRIG1 、Gadd45g表达量与肿瘤细胞自噬、凋亡、侵袭的相关性.方法:选择2014年6月～2017年12月期间在我院接受手术切除的垂体瘤患者并留取侵袭性垂体瘤组织、非侵袭性垂体瘤组织,另取同期因颅脑外伤在我院接受手术治疗的患者作为对照并留取正常脑组织;测定组织样本中LRIG1 、Gadd45g及自噬、凋亡、侵袭基因的mRNA表达量.结果:侵袭性垂体瘤病灶和非侵袭性垂体瘤病灶组织中LRIG1 、Gadd45g 、Beclin1 、LC3-II 、Bax 、NKG2D 、E-cadherin的 mRNA 表达量均显著低于正常脑组织,PTTG1 、c-Myc 、Gal-3 、Bcl-2 、EphA2 、HSP27 、MMP14 、VEGF的mRNA 表达量均显著高于正常脑组织且侵袭性垂体瘤病灶组织中 LRIG1 、Gadd45g 、Beclin1 、LC3-II 、Bax 、NKG2D E-cadherin的mRNA表达量均显著低于非侵袭性垂体瘤病灶组织,PTTG1 、c-Myc 、Gal-3 、Bcl-2 、EphA2 、HSP27 、MMP14 、VEGF的 mRNA 表达量均显著高于非侵袭性垂体瘤病灶组织;LRIG1 、Gadd45g的mRNA表达量与Beclin1 、LC3-II 、Bax 、NKG2D 、E-cadherin的mRNA表达量呈正相关,与PTTG1 、c-Myc 、Gal-3 、Bcl-2 、EphA2 、HSP27 、MMP14 、VEGF的 mRNA 表达量呈负相关.结论:垂体瘤病灶内LRIG1 、Gadd45g的低表达能够抑制肿瘤细胞的自噬及凋亡、促进肿瘤细胞的侵袭.
