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超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究
目的 探讨超声靶向微泡破碎(UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导pEGFP-N3质粒转染肝癌细胞HepG2的效率及对细胞增殖的影响.方法 体外培养HepG2细胞,随机分为6组:(1)空白对照组(C)；(2)超声(U)+微泡(M)组；(3) PEI-Gal(P)组；(4)P+M组；(5)P+U组；(6)P+U+M组.转染24 h后荧光显微镜观察HepG2细胞中绿色荧光蛋白质的表达,流式细胞术检测转染率,MTT法检测细胞活性.结果 P+U+M组转染率为(29.16±1.78)％,明显高于其他各组(P均＜0.05),U+M组转染率低(15.63±1.81)％.P+U+M组存活率为(83.48±0.93)％,低于U+M组(86.37±1.56)％和P+U组的(89.54±0.91)％(P＜0.01).结论 UTMD联合PEI-Gal能显著增强pEGFP-N3质粒转染肝癌细胞HepG2的效率.
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超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺促凋亡素基因治疗肝癌移植瘤的实验
目的 探讨超声靶向微泡破碎(UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用.方法 建立c57BL/6小鼠皮下肝癌移植瘤模型,随机分为4组:对照组；PEI-Gal+质粒组;PEI-Gal+超声+质粒组；PEI-Gal+ UTMD+质粒组.对组织行冰冻切片采用免疫荧光法检测转染率、Tunel检测凋亡率.观察肿瘤的体积和组织学变化,同时计算抑瘤率.采用免疫组织化学法检测移植瘤Bcl-2及Caspase-3蛋白在各组肿瘤标本中的表达.结果 PEI-Gal+ UTMD+ pEG-FP-N3组基因转染效率明显高于对照组、PEI-Gal+质粒组与PEI-Gal+超声+质粒组(P均＜0.01且对组织无明显损伤.治疗12天后PEI-Gal+ UTMD+ pCDNA-VP3组肿瘤凋亡率(34.57％±3.56％)、抑瘤率(56.6％)均显著高于对照组和PEI-Gal+质粒组(P均＜0.01).肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显下降,Caspase3蛋白表达增加与其他各组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺能显著增强基因转染效率,且对组织无明显影响.联合凋亡素基因能通过诱导凋亡抑制肿瘤生长发挥抗瘤作用.
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超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺介导凋亡素基因诱导肝癌细胞凋亡的研究
目的:探讨超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因(VP3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法:体外培养HepG2细胞,随机分为4组:(1)对照组;(2)PEI-Gal组;(3)PEI-Gal+超声组;(4)PEI-Gal+超声+微泡组.转染24 h后荧光显微镜观察pEGFP-VP3在HepG2细胞中的表达,流式细胞仪检测转染效率,RT-PcR和Western blot分别检测VP3 mRNA和蛋白表达水平,AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率.结果:流式细胞仪、RT-PCR和Western blot分析表明,PEI-Gal+超声+微泡组的转染效率为(28.83±2.07)%、VP3 mRNA水平为0.92±0.02,蛋白水平为1.65±0.06,HepG2凋亡率为(37.40±2.12)%,均显著高于其他各组(均P<0.01).结论:UTMD联合PEI-Gal可明显提高VP3基因转染HepG2细胞的效率及在HepG2细胞内的表达,增加HepG2细胞的凋亡率.
