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Xpert MTB/RIF检测技术在骨关节结核诊断中的应用价值
目的 采用核酸扩增检测法(Xpert MTB/RIF)检测骨关节结核患者脓液标本,评价该方法在骨关节结核病诊断中的应用价值.方法 收集2014年8月-2015年3月杭州市红十字会医院住院治疗的骨关节结核患者67例及非结核性骨关节患者30例的脓液标本进行Xpert MTB/RIF检测、抗酸染色法和结核分枝杆菌液体培养(TB培养).以临床(含病理)诊断为金标准,根据3种检测方法的灵敏度和特异度,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行比较分析.结果 67例骨关节结核患者脓液标本,Xpert MTB/RIF、抗酸染色、TB培养3种方法的灵敏度分别为82.09％、8.96％和23.88％,特异度分别为96.67％、100.00％和100.00％;ROC曲线下的面积分别为0.89、0.54和0.62(均P＜0.01).结论 Xpert MTB/RIF比抗酸染色和TB培养的特异度和灵敏度高,且检测耗时短.
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NAT技术在德宏地区献血标本输血传染病筛检中的应用
目的 应用NAT技术对德宏地区献血标本进行病毒核酸检测,探讨NAT技术对缩短ELISA法检测HIV、HBV和HCV“窗口期”、防范病毒变异与静默感染漏检的作用.方法 采用ELISA和NAT检测技术同步对献血标本分别进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA检测,对ELISA方法检测阴性NAT检测阳性的献血者进行追踪.结果 14 233例ELISA检测阴性献血者标本中NAT联检阳性14例,鉴别试验HBV DNA阳性12例,未能鉴别病毒种类2例,未检出HIV-1 RNA、HCV RNA阳性.对HBV DNA阳性献血者进行1～3次追踪确认,发现1例为HBV“窗口期”感染,11例为OBI感染.结论 血站实施病毒NAT筛检能进一步提高血液的安全性.
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细菌室能力评价中考核盲样检测分析
目的 通过盲样检测工作,总结积累经验,促进提高实验室检测水平和处置突发公共卫生事件的技术应对能力.方法 采用国标、行标检验方法,对包括1份病原菌、1份核酸和2份血清三个考核类别的盲样,进行检测及鉴定.结果 四份盲样中,病原菌检测标本分离出黄金海岸沙门菌;核酸标本检测出携带CTX毒力基因的O139群霍乱弧菌;其中1份血清标本,虎红平板凝集试验和试管凝集试验均为阳性,效价为1:100,另1份血清标本两试验均为阴性.结论 以室内质量控制为基础的室间质量评价,是确定实验室检测能力、评估和证明检测结果可靠性的客观手段.
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ELISA方法与NAT方法检测HIV结果分析
目的 比较第3代HIV抗体检测试剂、第4代HIV(1+2)抗原抗体联合检测试剂及HIV核酸检测试剂的检测效果.方法 分别用无偿献血者血标本、国家参考品、卫生部临检中心室间质评样本、抗-HIV质控血清考评4种ELISA试剂的灵敏度、特异性、假阳性率、精密度、符合率及低检测限;对经ELISA初筛合格的血标本进行NAT筛查.结果 4种ELISA试剂对无偿献血者标本进行HIV初复检,特异性分别为99.92%,99.86%,99.87%,99.91%,灵敏度均为100%;检测国家参考品的符合率均达到国家要求;检测室间质评样本的符合率均达100%;国产试剂D对质控品检测的灵敏度较弱;2010年NAT检测未发现HIV RNA阳性标本.结论 4种ELISA国产、进口试剂对HIV抗体检测的特异性和敏感性没有显著性差异;目前本中心NAT检测尚未检出HIV窗口期标本.
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核酸检测在血液HBV筛查中的应用研究
目的:了解沈阳地区乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性献血者中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染状况,探讨HBV核酸扩增检测(nucleic acid amplification testing,NAT)技术应用于血液筛查的意义.方法:在酶联免疫法(enzyine immunoassay,EIA)检测的基础上,应用TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法对HBsAg EIA阴性血液标本进行HBV DNA的NAT检测.对NAT阳性标本进一步做乙型肝炎病毒血清标志物(HBV Marker,HBV-M)及核酸定量检测.结果:共检测了105,152例HBsAg阴性的血液标本,检出HBV DNA阳性标本15例,阳性率0.014%.Abbott酶联免疫试剂检测发现,15例标本中有6例标本的HBV-M五项指标检测全部阴性,9例为HBsAg阴性但其它标志物阳性.其中10例HBV DNA阳性标本再经Roche试剂进行核酸定量检测,HBV DNA核酸含量高为149 IU/ml.结论:在HBsAg ELA阴性献血者中仍有极少数的HBV感染者;核酸扩增检测和酶联免疫检测互补,能够缩短血液筛查中HBV检测窗口期,特别是对提高HBsAg阴性血液标本中HBV感染检出率具有重要价值.
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核酸扩增检测技术预防输血传染病的应用现状及研究进展
本文总结了国内外将核酸扩增检测(NAT)技术应用于供者血液检查的现状和方法学方面的研究,证明NAT技术应用干常规的血液筛检可显著降低已经感染但无症状的处于抗体"窗口期"的献血者漏检,避免或减少受血者HBV、HCV和HIV感染的机会.但是,目前在全世界范围内实施NAT还存在一定的困难,人们正在努力使该试验自动化,并且简便、安全、廉价,尤其是朝着混合技术的方向发展.
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HBV酶联免疫阳性血清的核酸检测抽样分析
乙肝是由HBV引起的病毒性肝炎.我国是乙肝的高发国家[1],为确保临床用血安全,自1993年卫生部颁布《血站基本标准》后,血站对所有采集的血液标本使用酶联免疫(ELISA)试剂进行HBV检测.随着试剂质量不断提高,输血感染乙肝的风险已大大降低.但由于ELISA法检测的是HBV的抗原或抗体,而"窗口期"、病毒变异、低滴度抗原及非典型血清转阳过程等因素易造成HBV的漏检[2].核酸扩增检测技术(NAT)可以和ELISA形成互补,有效提高病毒感染血液窗口期的检出率[3],进一步降低经输血传播病毒的风险[4～6],武汉血液中心自2011年7月引入Roche公司的COBASS201核酸检测系统,逐步开展了血液筛选的NAT研究.
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2011年杭州地区无偿献血者血液核酸筛查结果分析
目的 探讨核酸扩增检测2011年杭州地区无偿献血人群HBV、HCV、HIV-1感染的收益情况.方法 采用PROCLEIX ULTRIO(R) Assay和2种不同厂家ELISA试剂,对2011年杭州地区无偿献血者血液标本进行HBV、HCV、HIV-1感染性标志物的筛查.ULTRIO初次呈反应性标本进行复试和鉴别试验,并对部分初次反应性标本进行追踪.结果 在检测的131 594例献血者标本中,585例ULTRIO初试呈反应性,反应性率为0.44％.585例UL-TRIO初次检测反应性标本中,418例为核酸种类可鉴别、44例为核酸混合检测反应性、123例为NAT初试反应性而重复无反应.在核酸鉴别反应性标本中,HBV DNA反应性为370例(88.5％)、HCVRNA反应性为29例(6.9％)和HIV-1 RNA反应性为19例(4.6％).整体标本中97例为HBV DNA反应性而HBsAg无反应性,核酸检测确认收益率(yield rate)为0.07％.追踪分析46例NAT初试反应性而重复无反应的献血者,结果显示6例标本ULTRIO结果呈反应性(其中2例鉴别为HBV DNA反应性).结论 应用核酸扩增检测能有效提高血液安全,降低输血传播性疾病风险;而献血人群中核酸检测收益标本主要为HBV DNA反应性而HBsAg无反应性.
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乌鲁木齐地区无偿献血者HBV核酸检测结果分析
目的 了解乌鲁木齐地区无偿献血人群乙型肝炎病毒(HBV)感染的状况和无偿献血者的血液经酶免疫检测法(ELISA)筛查乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的感染状况,探讨采用核酸扩增技术(NAT)对血液进行筛查的可行性,以进一步改进献血者筛查方法,降低输血传播疾病残余风险.方法 采用2种不同试剂厂家的ELISA试剂对无偿献血者血液进行HBsAg筛查,采用核酸扩增检测(NAT)血筛系统检测无偿献血者血的HBV DNA;并对ELISA检测阴性,HBV DNA阳性标本进行确认和追踪分析,以确定血清学感染状况.结果 共筛查2011年3～10月乌鲁木齐地区无偿献血者14 696名,HBsAg阳性率为0.52％ (76/14 696);HBV DNA阳性率0.22％ (32/14696);检出2例HBV DNA阳性标本,经过追踪分析,第1例发生了血清学转换,为“窗口期”感染,第2例无血清学转换,但乙肝核心抗体持续阳性,为隐匿性乙型肝炎.结论 ELISA检测后血液安全性有了很好的保障,但是依然存在输血传播疾病残余风险,NAT检测可降低输血残余风险,从而提高输血安全.
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超速离心浓缩技术富集HBV和HCV颗粒的效果研究
目的 分析超速离心浓缩(简称超浓缩)技术对HBV和HCV病毒颗粒的富集效果.方法 将8份不同浓度的HBV阳性标本(10、102、103 IU/ml各2个、104和105 IU/ml各1个)和9份不同浓度HCV阳性标本(102 IU/ml 1个、103 IU/ml 3个、104 IU/ml 3个,105、106 IU/ml各1个),4℃ 24 600 g超速离心1h,9.6倍浓缩富集病毒；使用Roche COBAS AmpliPrep/COBAS Taq-Man HBV及HCV定量试剂盒对原标本及浓缩标本做HBV及HCV定量测定,计算病毒回收率.结果 经9.6倍超浓缩处理后,8份HBV阳性标本的病毒含量均明显上升,平均是原标本的(5.92±1.98)倍,浓缩处理的病毒回收率为(61.65±20.67)％；9份HCV阳性标本的病毒含量亦均明显上升,平均是原标本的(4.70±1.43)倍,浓缩处理的病毒回收率为(48.95±14.84)％.结论 超速离心处理可有效富集HBV及HCV颗粒,病毒浓缩效果显著.
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应用核酸扩增技术对血液中HBV、HCV和HIV-1检测
目的探讨采用核酸扩增技术(NAT)对血液进行HCV、HBV和HIV-1核酸检测的可行性.方法采用手工法将血清学检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2和TPHA呈阴性,以及ALT＜40U的血浆标本进行48份×50μl混合;超速离心浓缩病毒后提取病毒核酸,采用Roche COBAS Amplicor分析系统对微量血浆混合标本进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA的检测;阳性反应的混合标本进行交叉混合和单份确认检测.结果 18 621份血清学检测合格的血液中,发现5份HBsAg阴性、HBV DNA呈阳性的血液,阳性率为0.027%(5/18621).经进一步随访6～20月显示,2名献血者为HBV低水平感染,1例为HBV血清转换窗口期感染.结论 NAT检测能够发现HBV低水平和窗口期感染的标本.
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天津市无偿献血者HBV、HIV和HCV核酸检测分析
目的 了解天津市健康献血人群中,艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)“窗口期”患者的发生率,对无偿献血人群的血标本进行HIV、HBV和HCV核酸检测的可行性评估.方法 从无偿献血人群血浆中提取HIV、HBV和HCV核酸,采用转录介导扩增技术(TMA)进行检测,同步利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV、HBV和HCV抗原或抗体.结果 53431份献血者血标本中检测出HBV“窗口期”标本25份,检出率0.047％；未检测出HIV,HCV“窗口期”标本.结论 核酸检测可有效的检测出无偿献血人群中HIV、HBV和HCV的“窗口期”标本.天津市无偿献血人群中存在HBV的“窗口期”潜在感染的危险,应考虑在该地区无偿献血人群中进行核酸检测.
关键词： 输血 核酸扩增检测 HIV/HBV/HCV -
深圳宝安地区无偿献血者血液筛查后HIV传播的危险度评估
目的 评估无偿献血者经血液筛查后HIV传播的危险度.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)常规筛查血液,对1998～2007年常规ELISA筛查阴性血液采用核酸技术检测HIV-1 RNA.结果 196 679份无偿献血标本中,抗HIV 筛查阳性345例(0.18%),确认阳性29 份(1.5/万),抗HIV阴性标本中未发现HIV-1 RNA阳性样本.结论 无偿献血者经血液筛查后,HIV传播的危险度较低,但仍需采取措施提高血液的安全性.
