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雷公藤内酯醇对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制
[目的]探讨雷公藤内酯醇(TPL)对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制和凋亡诱导作用及作用机制.[方法] MTT法检测TPL对细胞增殖的影响,Hoechst荧光染色观察凋亡细胞形态变化,AnnexinV/PI流式细胞仪标记法检测TPL对HepG2细胞凋亡作用的影响,Western blot检测caspase-3、8、9与PARP的表达情况.[结果]经MTT检测,10、20、40、80nmol/L浓度TPL作用24h后HepG2细胞的抑制率分别为15.2％ 、22.5％ 、34.9％和40.7％:48h后抑制率分别为21.5％ 、34.8％、44.1％和44.8％;72h后抑制率分别为31.6％、47.2％ 、51.6％和56.0％;抑制作用呈时间和剂量的依赖性.10、20、40、80nmol/L浓度的TPL作用24h的HepG2细胞,hoechst荧光染色显微镜下均出现明显的凋亡细胞;AnnexinV/PI流式细胞仪检测其凋亡率分别为8.89％ 、9.81％、14.69％和22.04％,对照组凋亡率为7.35％;Western blot结果显示,其caspase-3、9、PARP蛋白活化显影,且均较对照组显影增强,显影强度随TPL浓度的增加而增强,未见caspase-8活化显影.[结论]TPL通过诱导HepG2凋亡发挥增殖抑制作用,其机制可能与caspase-3、9活化有关,即与线粒体通路相关,与caspase-8即死亡受体通路无关.
关键词： 雷公藤内酯醇(TPL) 细胞凋亡 肝肿瘤 HepG2 -
雷公藤内酯醇对K562细胞热休克蛋白70表达及拓扑异构酶活性的影响
目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)对K562细胞热休克蛋白70(HSP70)表达、溶酶体膜透化作用(lysosomal membranepermeabilization,LMP)以及对DNA拓扑异构酶(TOPO)Ⅰ、Ⅱ的影响.方法:应用MTT法检测TPL对K562细胞增殖的影响;Westernblot法检测TPL对K562细胞热休克蛋白70的影响;用丫啶橙重新定位法检测,TPL对LMP的影响;通过电泳法测定TPL对K562细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ活性的影响.结果:TPL对HSP70蛋白表达有抑制作用;TPL能明显诱导K562细胞LMP的发生:TPL不能抑制TOPO Ⅰ的活性,400μg/ml的TPL开始抑制K562细胞TOPO Ⅱ的活性.结论:TPL可能通过下调HSP70蛋白的表达,使HSP70失去了抑制LMP的功能,导致了LMP的发生;DNA拓扑异构酶不是TPL抑制K562细胞增殖的靶点.
