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Alloferon-1抗生肽串联重组表达及重组Alloferon-1体外抗肿瘤活性
目的:构建含胰蛋白酶酶切位点的Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段及其原核表达系统,了解有赖氨酸尾重组Alloferon-1( rAlloferon-1)体外抗肿瘤活性.方法:根据Alloferon-1序列不合精氨酸和赖氨酸的特点,构建C端加有含胰蛋白酶酶切位点赖氨酸的14 x Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段.采用pET42a 表达载体和E.coli BL21 DE3表达宿主菌,构建Alloferon-1重复串联DNA片段原核表达系统.SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组产物表达量,Ni-NTA亲和层析、胰蛋白酶酶切和Sephadex G-50层析法提纯14×rAlloferon-1-K及其rAlloferon-1 -K单体.BALB/c小鼠脾细胞分别与K562、KB和SGC肿瘤细胞共培养模,采用CCK-8法检测rAlloferon-1 -K、化学合成Alloferon-1( cAlloferon-1)及Alloferon-1 -K( cAlloferon-1 -K)体外抑制肿瘤细胞生长及增殖的活性并进行比较.结果:原核表达系统E.coli BL21 DE3pET142a-14 x Alloferon-l-K在IPTG诱导下能有效表达14×rAlloferon-1-K蛋白,其产量约为细菌总蛋白的30%.0.1～10 ng/ml 的rAlloferon-1-K具有明显提高小鼠脾细胞抑制K562、KB和SGC肿瘤细胞的生长及增殖(P＜0.01),rAlloferon-1 -K的抗肿瘤活性与cAlloferon-1及cAlloferon-1 -K比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:本研究成功构建了Alloferon-1抗生肽重复串联原核表达系统,有效地提高了Alloferon-1产量；而且rAlloferon-1 -K仍保持原有的体外抗肿瘤活性.
