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药物诱导细胞凋亡治疗肝癌
细胞凋亡(apoptosis)是细胞自然衰老、死亡的一种形式,是一切生物正常胚胎发生过程和人类发育过程细胞清除的正常途径.这一过程的紊乱,将导致人类发生多种疾病.许多研究资料表明,肿瘤的发生与细胞凋亡有密切关系[1],细胞凋亡异常在肿瘤发生和发展过程中具有非常重要的病理生理意义[2],细胞凋亡参与肿瘤的起始过程,并对癌症的发生起负相调控作用.Dive认为肿瘤的化疗、放疗的目的就是诱导肿瘤细胞凋亡.因此,在肝癌的治疗中不断地探讨新方法新途径,包括化疗药物、放射线、细胞因子、激素和基因编码等.近年来大量实验研究发现,肝癌细胞可以通过人为地触发细胞凋亡而被清除,其中药物诱导细胞凋亡对今后肝癌治疗研究提供了诱人的前景不同种类的化学药物,生物药物和中药对不同种类肿瘤敏感细胞有促进凋亡作用.部分化疗药物、生物药在体外实验中能诱导肝癌细胞凋亡,如顺铂、环磷酰胺、阿霉素、细胞因子等[3,4].下面就药物诱导细胞凋亡治疗肝癌研究简要综述如下.
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瑞香狼毒小鼠药物血清协同细胞毒化疗药物抗肝癌及机制研究
目的研究瑞香狼毒(SC)与细胞毒化疗药物的协同抗肝癌效应,探讨其协同抗癌作用机制.方法小鼠口服SC水提物10 g·kg-1,2 h后采集血清.将对数生长的人肝癌BEL-7402细胞用SC药物血清与阿霉素或VP-16联合处理,MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡,免疫组化测定细胞bcl-2蛋白表达,光学显微镜观察细胞形态改变.结果 50 g·L-1SC小鼠药物血清可明显增强阿霉素和VP-16体外抗肝癌活性,IG50分别由0.81 mmol·L-1和1.26mmol·L-1减小为0.32 mmol·L-1和0.29 mmol·L-1.流式细胞仪DNA分布图可见,VP-16 1 umol·L-1与50 g·L-1小鼠药物血清联合处理组C2/M期细胞较单独VP-16组增加68.2%(从0.22到0.37),亚二倍体凋亡细胞增加100.0%(从0.25到0.50),Bcl-2阳性表达细胞降低47.8%(从0.46到0.24).光镜下可见联合处理组细胞生长停滞,数量显著减少,部分细胞体积缩小,染色质凝集,核碎裂;单独VP-16组细胞形态改变较轻.结论瑞香狼毒可增强细胞毒化疗药物抗肝癌活性.协同诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2阳性表达,阻止肿瘤细胞周期于G2/M期是其主要机制.
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胃癌细胞原代培养药敏检测的临床应用研究
目的:探讨胃癌对不同化疗药物的敏感性差异,从而对围手术期辅助化疗及晚期患者化疗起指导作用.方法:应用MTT比色法测定了151例体外原代胃癌细胞对化疗药物的敏感性.结果:无论是单药组间比较,还是联合药物组间比较,其敏感性的差异均有极显著意义,P<0.01;其中,单药以羟基喜树碱(HCPT)和丝裂霉素(MMC)的敏感性为好,其敏感率分别为62.91%、52.98%;联合药物以5-氟尿嘧啶(5-FU) 加HCPT和5-FU加MMC的敏感性为好,其敏感率分别为76.82%、60.93%.各单药分别与其对应的联合药物比较,除MMC与5-FU加MMC、多柔比星(ADM)与5-FU加ADM及斑蝥酸钠(奇宁)与5-FU加奇宁的敏感性差异无显著意义外P>0.05,其余药物的敏感性差异均有显著意义,P<0.05.结论:体外肿瘤细胞药敏试验对临床肿瘤化疗用药有很强的预见性,且能发现耐药病例;胃癌对联合药物的敏感性明显优于单药.
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大蹼铃蟾抗菌肽-2与IFN-α-2b和TNF-α对膀胱癌细胞株抑制活性的实验研究
目的:比较大蹼铃蟾抗菌肽-2(Maximin 2)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-α-2b(IFN-α-2b)对不同膀胱癌细胞株的抑制杀伤作用.方法:采用细胞培养及MTT比色法,检测Maximin 2、TNF-α及IFN-α-2b对3个不同膀胱癌细胞株的抑制作用及作用特点,计算量效回归曲线及50%抑制率.结果:Maximin 2对不同的膀胱癌细胞株在100 μg/mL左右(48 h)即达到50%抑制率浓度(IC50),并呈剂量相关性,与TNF-α、IFN-α-2b抑制作用的表现形式不同.Maximin 2抑制率高表现在第48 h,以后逐渐减弱, TNF-α、IFN-α-2b则在前24 h作用较弱,以后逐渐增强.结论:Maximin 2对不同的膀胱癌细胞株均有较强的抑制作用,同TNF-α、IFN-α-2b比较其作用机制有所不同,Maximin 2对膀胱癌细胞株的杀伤作用可能主要是通过对肿瘤细胞的直接抑制,并且相对容易失活.
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化疗药物对人肺腺癌细胞死亡受体DR4与DR5表达影响的研究
目的:研究化疗药物依托泊苷(Vp-16)、顺铂(DDP)、多西他赛(TXT)对A549细胞死亡受体(death receptor,DR)DR4、DR5基因表达的影响.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)方法对亚毒性剂量Vp-16、DDP和TXT作用不同时间后的人肺腺癌细胞株A549细胞的死亡受体DR4、DR5的mRNA表达进行半定量检测.结果:1)亚毒性剂量Vp-16可上调A549细胞DR4、DR5基因表达.7.5μg/mL Vp-16处理A549细胞8 h后,DR4/β-actin、DR5/β-actin的比值分别为1.13±0.13和1.06±0.25.7.5μg/mLVp-16处理A549细胞12 h后,DR4/β-actin、DR5/β-ac-tin的比值分别为1.18±0.20和1.02±0.02,两者与对照组之间比较,差异均有统计学意义,P＜0.05(P值分别为0.04、0.02、0.00和0.02).2)亚毒性剂量DDP和TXT对A549细胞DR4、DR5基因转录水平无明显影响.5μg/mLDDP、0.005 μmol/L TXT(约为4ng/mL)作用A549细胞4、8 h后DR4、DR5基因转录水平与对照组之间比较,差异无统计学意义,P＞0.05.结论:药物干预对TRAIL凋亡通路以及耐药机制的影响存在多样性.部分化疗药物可上调肿瘤细胞死亡受体DR4、DR5基因表达,同时不排除其他作用机制的存在.
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维生素E琥珀酸酯联合他莫昔芬抑制乳腺癌细胞增殖
目的:检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合他莫昔芬(tamoxifen)对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并分析调控Fas/FasL系统表达在抑制乳腺癌细胞增殖中的作用.方法:人乳腺癌细胞MCF-7(ER阳性)和MDA-MB-435(ER阴性)以VES联合他莫昔芬作用24和48 h,vES浓度为10和20μg/mL,他莫昔芬的浓度分别为1、5和10μmol/L.以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas/FasL表达的变化.结果:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用.药物联合作用后,乳腺癌细胞表现为明显的G0/G1期阻滞,MCF 7和MDA-MB-435细胞的凋亡率分别由(3.30±0.2)%和(4.88±0.9)%升高至(25.61±2.7)%和(23.33±1.1)%,流式细胞仪提示,MCF-7和MDA-MB435细胞表面的Fas分别由50.07和46.29升高至116.72和136.68;FasL分别由51.85和57.43升高至146.82和127.90.结论:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用,其机制可能与细胞表面Fas和FasL表达上调有关.
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化疗药物敏感试验指导原发性肝细胞癌术后化疗的临床研究
目的:探讨体外化疗敏感试验ATP-TCA系统对化疗药物疗效的评估作用,利用该系统指导肝细胞癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)患者的临床个体化疗.方法:获取50个HCC手术标本,采用ATPTCA系统评估5-氟尿嘧啶(5-FU)、丝裂霉素(MMC)、顺铂(DDP)、草酸铂(OXA)、表阿霉素(EPI)、健择(GEM)、伊利替康(CPT-11)、依托泊苷(Vp-16)和多西他赛(PTX)化疗药物的疗效.23例HCC患者接受术后ATP-TCA指导临床化疗,同时以20例HCC患者作为对照,观察临床疗效.结果:ATP-TCA系统可评估率为90.8%.对各种化疗药物部分-强敏感率分别为PTX 46%、CPT-11 44%、GEM 36%、MMC 14%、EPI 12%、DDP 8%、Vp-16 6%、OXA 6%和5-FU 4%;观察终点ATP-TCA组疗效指标(CR、PR、SD和PD)获得较好结果,P=0.008;观察期实验组和对照组患者死亡率差异无统计学意义,P=0.763;实验组较对照组在病情缓解率(ORR)以及手术后生存期及无疾病进展生存方面表现出明显的优势,P值分别为0.043 0、0.005 7和0.004 5.结论:ATP-TCA系统可以成功地应用于HCC患者.PTX、CPT-11和GEM对HCC具有较高疗效;根据体外药物敏感方案进行个体化疗,部分患者在病情缓解时间(TTP)以及手术后生存期方面获益.
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SKI-2053R对胃癌细胞作用的体外研究
目的:研究SKI-2053R对胃癌细胞株SGC-7901的作用及其机制.方法:MTT法检测SKI-2053R对SGC-7901的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期的变化及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达改变.结果:SKI-2053R可明显抑制SGC-7901的增殖活性,改变SGC-7901的细胞周期分布,降低PCNA的表达.结论:SKI-2053R对SGC-7901有明显的杀伤和抑制增殖的作用,其机制可能与下调PCNA的表达有关.
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贲门癌患者肿瘤细胞与外周血淋巴细胞体外药敏试验的相关性研究
目的:探讨贲门癌患者外周血淋巴细胞能否代替肿瘤细胞进行体外药敏试验,以指导不能行肿瘤细胞化疗药敏检测患者的临床化疗.方法:采用MTT法体外药敏试验,检测28例贲门癌患者外周血淋巴细胞和肿瘤细胞对9种临床常用抗癌药物的敏感性.结果:贲门癌患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞的体外药敏试验对9种抗癌药物的敏感性差异无统计学意义,P值为0.500～1.000.两种细胞药敏试验对5-FU、DDP、CBP、MTX、Vp 16、CTX和THP敏感,对ADM不敏感.结论:贲门癌患者外周血淋巴细胞与其肿瘤细胞对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性,外周血淋巴细胞化疗药敏检测对临床选择化疗药物具有重要参考价值.
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放射性粒子125I对H22肝癌细胞凋亡的研究
目的:探讨放射性粒子125I组织间植入诱导H22肝癌细胞凋亡的可能机制及影响.方法:分别把125I、DDP和两者联合植入荷 H22肝癌小鼠瘤体内28 d,观察肿瘤生长,应用流式细胞术检测离体的H22肝癌细胞凋亡情况.结果:125I、DDP植入肿瘤组织后,瘤体生长受到一定的影响;两者合用后致肿瘤生长变慢且出现变性坏死.细胞凋亡率:125I组为(16.12±1.46)%;DDP组为(10.30±1.96)%;联合组为(6.61±0.56)%,且有较多的死亡细胞.结论:放射性粒子125I组织间植入可诱导肿瘤细胞凋亡,与化疗药合用除诱导肿瘤细胞凋亡,还可导致肿瘤变性、死亡,是一种简便易行,安全有效的新治疗方法.
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TSA诱导胰腺癌BxPC-3细胞周期阻滞与凋亡的研究
目的:观察曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖及凋亡的诱导作用,探讨TSA抗胰腺癌的作用机制.方法:BxPC-3细胞应用TSA处理后采用流式细胞技术分析其细胞周期分布和细胞凋亡率,免疫组化方法检测细胞乙酰化组蛋白H4表达,Western blot分析p21 WAF1/CIP1蛋白表达.结果:TSA对胰腺癌BxPC-3细胞具有生长抑制作用,且呈时间和剂量依赖性.TSA可将BxPC-3细胞阻滞于G0/G1期,TSA组G0/G1期细胞达(61.8±2.5)%,较空白对照组(42.5±2.2)%和乙醇对照组(47.3±3.4)%明显增多(P=0.004);三组细胞凋亡率分别为25.5%、5.5%和5.1%(P=0.000).TSA组细胞p21 WAF1/CIP1蛋白表达及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调.结论:TSA对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和细胞周期具有影响作用并可诱导细胞凋亡,p21 WAF1/CIP1蛋白及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调可能是其抗胰腺癌作用机制之一.
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恩度对SGC-7901人胃癌细胞杀伤效应及其机制的初探
目的:探讨恩度对于SGC-7901人胃癌细胞的杀伤效应及机制.方法:应用MTT法观察恩度作用对SGC-7901人胃癌细胞的抑制效应;采用ANNEXIN-V染色法研究恩度对于SGC-7901人胃癌细胞的凋亡诱导作用;采用免疫细胞化学染色法研究恩度作用后Bcl-2及Bax蛋白表达的变化.结果:不同浓度的恩度对SGC-7901细胞的增殖抑制率为21.5%～57.8%(P<0.01),抑制效应随着浓度增加和作用时间延长而增强;各实验浓度的恩度均能诱导细胞凋亡发生,0.1、1.0、5.0、10.0和15.0 mg/L恩度作用48 h后SGC7901细胞的总死亡率分别为1.4%、27.2%、33.4%、43.5%、54.4%和67.0%;恩度作用后导致Bcl-2蛋白表达水平下降,而对于Bax蛋白无显著影响.结论:恩度通过诱导SGC-7901细胞发挥其抑制效应,其可能机制为抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.
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9-顺维甲酸诱导肺癌组织RARβ转录的研究
目的:观察9-顺维甲酸(9-cic-retinic acid,9-cis-RA)对肺癌组织和对照肺组织RARβ转录水平的影响.方法:应用组织块法培养肺癌组织和对照肺组织,并同时应用冷消化法原代培养肺癌细胞,观察培养组织中细胞的活力,采用RT-PCR法检测9-cis-RA处理24 h前后RARβ的mRNA表达水平.结果:9-cis-RA处理前非小细胞肺癌(NSCLC)组和小细胞肺癌(SCLC)组肺癌组织RARβ表达水平(0.521 6±0.167 1,0.582 9±0.211 6)较其对照肺组织(0.723 6±0.126 1,0.843 2±0.062 1)下降,P＜0.05.经9-cis-RA处理24 h后,NSCLC和SCLC组对照肺组织RARβ转录水平(0.778 9±0.132 6,0.816 1±0.510 2)较加药前(0.723 6±0.126 1,0.843 2±0.062 1)变化差异无统计学意义,P＞0.05.肺癌组织的RARβ的转录水平(0.769 1±0.136 6,0.779 2±0.176 6)较加药前(0.521 6±0.167 1,0.582 9±0.211 6)显著升高,P＜0.05.并且升高后的转录水平与对照肺组织的基础转录水平相近,NSCLC组(0.769 1±0.136 6)和SCLC组(0.779 2±0.176 6)间肺癌组织的RARβ的转录水平差异无统计学意义,P＞0.05.结论:RARβ的表达下降可能与肺癌的发生发展有关.9-cis-RA可诱导肺癌组织中RARβ的表达水平升高并且达到对照肺组织的表达水平.
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盐酸洛拉曲克在荷S180肉瘤小鼠组织中的分布及对体外培养肝癌细胞株的作用
目的:研究盐酸洛拉曲克(nolatrexed dihydrochloride,NLTX)在体外对正常人胚肝细胞Fb和人HepG2、QSG7703肝癌细胞株以及小鼠S180肉瘤细胞株的抗增殖作用;探讨其在荷S180肉瘤小鼠组织中的分布情况.方法:四氮唑盐(MTT)法测定NLTX在体外对细胞的抗增殖作用,高效液相色谱法测定在荷S180肉瘤小鼠血液、肝脏和肉瘤组织中NLTX的浓度.结果:NLTX在体外对HepG2、QSG7703以及S180肿瘤细胞株的半数抑制浓度分别为2.17、0.61及0.72 μg/mL,对正常人胚肝细胞Fb则为82.60 μg/mL;以100 mg/kg剂量单次灌胃给药后,NLTX在小鼠血、肝及肉瘤组织中可达到的高浓度分别为(18.24±5.68)、(40.12±16.81)和(16.08±7.64) μg/mL.结论:NLTX在体外有显著的抗细胞增殖作用,对肿瘤细胞的作用强度高于正常细胞,对肿瘤细胞的抑制作用有选择性;该化合物在小鼠组织中可以达到有效的治疗浓度.
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曲古抑菌素A诱导HL-60细胞凋亡机制的研究
目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的机制.方法:采用MTT方法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达.结果:0.1μmol/L的TSA可明显抑制细胞增殖,P<0.01;0.05 μmol/L的TSA可使细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),但0.1 μmol/L的TSA才能引起细胞凋亡(P<0.01);经0.1 μmol/L的TSA作用12 h后,Bax、Caspase-9和Caspase-3基因表达明显升高,P<0.01.结论:TSA诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达.
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麦胚提取物对抗肿瘤化疗的辅助调节
目的:研究麦胚提取物(WEE)对减轻肿瘤化疗的毒性,增强疗效的效果.方法:采用动物实验方法,对试验组化疗/荷瘤动物施于化疗的同时加喂WEE,观察肿瘤抑制率(STR)和白细胞总数的变化.结果:化疗同时给予WEE,能显著的提高STR(P＜0.05);能迅速回升化疗造成的外周血白细胞减少(P＜0.01).结论:WEE在肿瘤化疗中,可协同抑制肿瘤,提高外周血中白细胞的总数,进而调节生理功能,修复受损的组织或细胞,与其富含多不饱合脂肪酸(PUFA)有关.
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二甲肼诱发大鼠大肠癌癌前病变模型的肠道双歧杆菌数量研究
目的:探讨二甲肼(DMH)诱发的大肠癌癌前病变模型大鼠的肠道内双歧杆菌数量与大肠癌癌前病变的关系.方法:应用双歧杆菌属特异性引物实时定量PCR,对实验第3与第9周8只模型组大鼠以及同年龄的7只正常对照组大鼠肠道中的双歧杆菌数量进行检测.结果:第9周的正常对照组大鼠未见明显异常隐窝灶(aberrant crypts foci,ACF),同年龄的模型组平均每只大鼠大肠可形成(37.7±2.6)个ACF.第3周正常对照组与同年龄的模型组大鼠肠道双歧杆菌数量差异无统计学意义,P=0.652;第9周模型组大鼠肠道双歧杆菌数量低于同年龄的正常对照组,但差异无统计学意义,P=0.090.结论:肠道内双歧杆菌的数量与大鼠大肠癌癌前病变没有明显相关性.
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七叶树皂苷-Ia的人肠内细菌生物转化产物及其抗肿瘤活性研究
目的:探讨人肠内细菌和短乳杆菌粗酶转化七叶树皂苷-Ia,阐明转化产物结构,研究其抗肿瘤活性.方法:采用人肠内细菌和短乳杆菌粗酶分别与七叶树皂苷-Ia共温孵方法,通过色谱技术分离、纯化转化产物,应用波谱技术确定转化产物结构.结果:七叶树皂苷-Ia可由人肠内细菌和短乳杆菌粗酶转化产生异七叶树皂苷Ia、去酰基七叶树皂苷I、21β-O-巴豆酰基原七叶树皂苷元和原七叶树皂苷元.去酰基七叶树皂苷I对小鼠肉瘤S-180、肝癌和肺癌细胞的生长具有抑制作用.结论:七叶树皂苷-Ia是"前药",人肠内细菌和短乳杆菌粗酶能够转化七叶树皂苷-Ia;转化产物去酰基七叶树皂苷I有抗肿瘤活性,是有开发潜力的抗肿瘤候选药物.
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喹喔啉双氮氧化物衍生物QN-2013的乏氧细胞毒性和放射增敏作用
目的：检验和评价喹喔啉双氮氧化物衍生物QN-2013的选择性乏氧细胞毒性和放射增敏作用。方法：体外细胞毒性、放射增敏作用及体内抗肿瘤活性，分别用集落形成法和肿瘤生长延迟法检验。细胞周期的变化、DNA损伤和损伤DNA的修复分别以流式细胞术和“彗星”分析法测定。结果：QN-2013对乏氧和富氧HeLa-S3细胞的等毒性浓度ICN250和ICair50分别是0.08和1.7 mmol*L－1，乏氧细胞毒性比率(hypoxic cytotoxicity ratio, HCR)为21。这说明QN-2013具有一定的乏氧细胞毒性，但弱于代表性生物还原药SR-4233。在1 mmol*L－1以下时，QN-2013的体外放射增敏作用比MISO(misonidazole)弱，但随药物浓度增加近似按指数增大，而荷瘤小鼠腹腔给药则体内增敏作用与施药剂量无明显依赖关系。在细胞和分子水平上，QN-2013诱发乏氧HeLa-S3细胞G2M期阻断，引起DNA双链断裂，且抑制辐射DNA损伤的修复。结论:QN-2013是一中度活性的乏氧选择性细胞毒剂，体内外实验表明具有一定的放射增敏作用，明显增强辐射抗肿瘤能力。其作用机制可能是通过直接损伤DNA和抑制DNA修复。这些结果提示虽QN-2013本身可能不是理想的生物还原药，但喹喔啉氮氧化物系列不失为探索新抗癌药应重视的领域之一。
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β-咔啉-3-甲酰胺类衍生物的合成及与DNA的作用
β-咔啉类衍生物是一类广泛分布于自然界的生物碱，对其衍生物的报道目前仍层出不穷［1］。对于β-咔啉类衍生物的研究是始于简单的化合物Harman和Norharmane 以及它们的酯与苯二氮受体的相互作用［2］，这类药理作用激发了人们对β-咔啉类衍生物的研究及其药理作用的探索。近几年来的研究表明，β-咔啉类衍生物具有抗肿瘤活性［3, 4］，而且某些β-咔啉类衍生物对肿瘤细胞具有较高的选择性，这些研究结果更激起了人们对β- 咔林类抗癌衍生物的兴趣。近期研究工作表明，对于β-咔啉类衍生物,在其3-位进行结构修饰，对活性有明显影响［5］。因此，我们针对β-咔啉母核的结构特点，在其3-位上予以氨甲酰基取代，合成了一系列β-咔林3-甲酰胺类新衍生物,并利用黏度滴定、Tm（解链温度）测定及紫外光谱滴定法以及微量量热等技术研究其与CT-DNA的作用。在与CT-DNA的相互作用中 ,它们均能引起CT-DNA Tm的改变，黏度滴定实验表明该系列化合物与DNA以嵌插方式结合，紫外光谱滴定法表明该系列化合物与DNA的结合强度是有差异的，这与抗肿瘤筛选的结果一致。微量量热研究结果表明这类化合物与DNA的作用是熵驱动的。这些结果均表明该β-咔啉-3-甲酰胺衍生物是以DNA为靶，并通过与DNA碱基的嵌插产生生物效应。
