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端粒酶启动子肿瘤靶向TNF相关凋亡诱导配体基因抗大肠癌细胞HT-29的活性研究
目的:探讨在端粒酶(hTERT)启动子驱动下TRAIL基因在大肠癌细胞HT-29的表达及其杀细胞作用.方法:通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因转入大肠癌细胞HT-29,流式细胞仪检测GFP/TRAIL的表达和HT-29细胞凋亡率.结果:端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL基因和CMV启动子驱动的GFP(绿色荧光蛋白)基因在HT-29内的表达率分别达31.4%和67.0%;GFP/TRAIL基因对HT-29细胞的生长抑制率和凋亡率分别达74.2%和25.8%,与PBS和Ad/CMV-GFP比差异都有显著性意义(P＜0.05).结论:端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL融合基因能在大肠癌细胞中有效表达;TRAIL基因对大肠癌细胞HT-29有明显的抑制生长和促凋亡作用.
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PICK1蛋白83位点氨基酸对PDZ结构域的影响
目的:研究PICK1 (protein interacting with C kinase 1)蛋白PDZ结构域内83位点赖氨酸( K83)对PICK1和AMPA受体GluR2亚单位相互作用的影响.方法:利用计算机对PICK1 PDZ结构域和GluR2 C末端4个氨基酸残基进行对接模拟,然后将K83进行虚拟点突变,计算并观察突变后结构和键能的改变.利用实验室已有的野生型全长PICK1 cDNA质粒为模板,构建点突变质粒,与野生型GluR2共转到HEK293T细胞,观察两者在细胞内定位和分布的改变.结果:当野生型PICK1与GluR2共转染时,HEK293T细胞有大量PICK1和GluR2共定位的集簇(cluster).当我们把构建的PICK1突变体与GluR2共转染时,不同的突变体表现出不一样的改变.结论:改变K83位点的氨基酸结构,很可能会改变PICK1 PDZ结构域与GluR2 C末端结合所形成的疏水、氢键、静电相互作用,使得PDZ结构域与GluR2 C末端的结合能力发生不同程度的改变.
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人类pygo1基因的生物信息学分析
目的:对人类pygo1基因编码蛋白质进行结构和功能预测.方法:利用生物信息学方法和工具对PYGO1蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构、亲(疏)水性进行分析.结果:PYGO1蛋白氨基酸残基组成中脯氨酸含量高,分子式C1943H2937N577O635S18,相对分子质量45,等电点6.38;可能为非跨膜的亲水性蛋白;α-螺旋和无规卷曲为其主要结构元件,含有一个植物同源结构域.结论:人类pygo1基因可能作为转录因子与其他蛋白共同作用调节心脏发育及心脏病的发生过程.
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β-catenin在大鼠髋脱位股骨头浅层软骨中的表达及意义
目的 检测β-catenin在大鼠髋脱位股骨头软骨浅层中的动态表达,探讨β-catenin与髋脱位关节软骨早期退变以及与在不同应力区域表达的关系.方法选取新生Wistar大鼠80只,随机分成髋脱位组(n=40)和对照组(n=40),持续固定10 d建立新生大鼠髋脱位模型后去除外固定,分别于鼠龄第2、4、6、8周处死、离断髋关节,用于测量组织形态和β-catenin免疫组化,应用qRT-PCR检测股骨头软骨中β-catenin的mRNA表达.结果①成功制作髋脱位动物模型,髋臼指数及股骨头指数在不同时段表现出显著差异(P<0.001).②髋脱位组镜下可见软骨排列紊乱,后期出现软骨表面裂隙以及溃疡;Mankin评分早期无显著性差异;于第4、6、8、周表现出显著差异.股骨头浅层软骨β-catenin的表达于第2周时实验组明显高于对照组;第4周时实验组明显低于对照组;第6、8周实验组表达显著增多.髋脱位组中Mankin评分与β-catenin之间有相关关系.β-catenin的mRNA表达在不同时段均有显著差异,在对照组中呈现逐渐下降趋势,而在实验组中却逐渐上调.结论β-catenin在髋脱位股骨头浅层软骨的发育和退变中发挥着双向调控作用,可能与异常应力的作用有着密切关系.
