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葡萄籽原花青素对氯化钴诱导的视网膜神经节细胞 RGC－5缺氧损伤的保护作用
目的：探讨体外葡萄籽原花青素对氯化钴致视网膜神经节细胞RGC－5缺氧损伤模型的保护作用。方法：采用氯化钴（400μmol／L）诱导RGC－5细胞化学缺氧损伤，观察葡萄籽原花青素（40μg／mL ）对缺氧的抗损伤作用。以MTT法检测细胞存活率；Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡情况；以H2 DCFDA荧光法检测细胞内活性氧的变化；实时定量PCR检测细胞Bcl－2、半胱酰胺天冬氨酸蛋白酶（ caspase ）9和caspase 3 mRNA水平。结果：与缺氧对照组比较，葡萄籽原花青素预处理可提高细胞存活率（ P＜0．001）、减少细胞凋亡（ P＜0．001） ，并减少细胞内的活性氧（ P ＜0．001）；葡萄籽原花青素还显著升高 Bcl－2基因的表达（ P ＜0．001） ，显著降低caspase 9和caspase 3基因的表达（ P＜0．001）。结论：葡萄籽原花青素对氯化钴诱导的视网膜神经节RGC－5细胞缺氧损伤起保护作用，其保护作用可能与细胞内活性氧减少、Bcl－2基因表达上调及casepase 9和casepase 3基因表达下调有关。
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G蛋白偶联受体17在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用
目的:探讨G蛋白偶联受体17(GPR17)在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用.方法:采用氯化钴(400μmol/L)诱导RGC-5细胞化学缺氧损伤,观察GPR17的表达及GPR17配体的作用,并通过小干扰RNA(siRNA)降低GPR17的表达深入研究GPR17在细胞缺氧损伤中的作用.MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测GPR17 mRNA相对表达量.结果:氯化钴处理后,细胞中GPR17 mRNA相对表达量由0.26±0.08上调至0.36±0.05(P<0.01).与未经GPR17配体预处理的缺氧细胞比较,GPR17激动剂尿苷5'-二磷酸二钠盐、尿苷5'-二磷酸葡萄糖二钠盐、LTD4预处理细胞的存活率分别降低了29.6％ 、31.8％ 、33.9％(均P<0.01);而其拮抗剂坎格雷洛预处理细胞的存活率升高了33.2％(P<0.01).GPR17 siRNA处理可以抑制缺氧导致的GPR17 mRNA表达上调(P<0.01),减少缺氧导致的细胞凋亡[未加siRNA、NC siRNA和GPR17 siRNA组细胞的凋亡率分别为(39.73±2.06)％,(42.50±3.64)％ 和(24.98±2.16)％,P<0.01].结论:GPR17介导了RGC-5细胞的缺氧损伤,抑制GPR17表达可减轻缺氧损伤.
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低氧模拟剂氯化钴对人单核细胞白血病细胞株SHI-1化疗敏感性的影响
[目的]研究氯化钴(Cobalt Chloride,CoCl2)模拟的化学性低氧是否能增强人单核细胞白血病细胞株SHI-1细胞对依托泊苷(VP-16)的敏感性,并探讨及其分子机制.[方法]在培养基中加入低氧模拟剂CoCl2(终浓度为100 μmol/L)模拟化学性低氧环境(低氧组),并用正常培养基作对照(对照组).分别在对照组和低氧组中加入不同浓度的VP-16(0.5,1.0,2.0 μg/mL),即VP-16组和低氧+VP-16组.检测各组的细胞的增殖抑制率(四甲基偶氮唑盐法),细胞凋亡率(流式细胞术),FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcl-2及Bax基因mRNA表达(实时定量PCR方法).[结果]①低氧组SHI-1细胞增殖受到抑制,并随作用时间延长而逐渐增强.②低氧模拟剂CoCl2也可在一定程度上诱导SHI-1细胞凋亡,并对VP-16诱导的SHI-1细胞凋亡有促进作用(P<0.05).③低氧模拟剂CoCl2可以增强FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcl-2及Bax基因mRNA表达(P<0.05),且Bax/Bcl-2比值升高更为明显.CoCl2并不能使VP-16作用24h后SHI-1细胞内FAK、AKT和Bcl-2基因mRNA表达发生明显变化,但可以使ERK、HIF-1α和Bax mRNA表达量增加(P<0.05),且Bax/Bcl-2比值升高.[结论]CoCl2模拟化学性低氧对SHI-1细胞生物学活性有一定的抑制作用并能增强其对VP-16的化疗敏感性,其分子机制可能涉及ERK介导的信号通路对HIF-1α表达的调控作用,以及HIF-1α介导的信号传导通路对Bax和Bcl-2基因表达的不均衡调控.
