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VEGF在HaCaT细胞中的自分泌作用
目的:检测VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT细胞中可能的自分泌作用.方法:用MTT法,检测不同浓度外源性VEGF165(0,1,5,10,25,50,100 ng/ml)和不同浓度VEGF特异性抑制剂阿瓦斯丁(0,0.063,0.125,0.25,0.50,1.0,2.0 mg/ml)作用下HaCaT细胞增殖的变化;用细胞迁移实验,检测不同浓度VEGF165和0.5 mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞迁移的变化;蛋白免疫印迹检测10 ng/ml VEGF165和0.5mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化情况.结果:VEGF165剂量依赖性地促进HaCaT细胞的增殖和迁移能力;而阿瓦斯丁剂量依赖性地抑制其增殖能力,0.50 mg/ml阿瓦斯丁可以显著性降低其迁移能力;10 ng/ml VEGF165显著性促进HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化,而对0.5 mg/ml阿瓦斯丁预处理过的HaCaT细胞的ERK1/2磷酸化没有促进作用.结论:VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT中存在着自分泌作用.
关键词： 角蛋白细胞/药物作用 血管内皮生长因子类/药理学 抗体 单克隆/治疗应用 细胞 培养的 HaCaT细胞 VEGF 阿瓦斯丁 自分泌 -
VEGF对缺血/再灌注损伤胰腺细胞凋亡的影响
目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)对缺血/再灌注损伤胰腺组织细胞凋亡的影响.方法 将雄性sD大鼠30只随机分为3组(n=10),A组为假手术组,B组为缺血/再灌注损伤组,C组为缺血/再灌注损伤+VEGF反义寡核苷酸组.通过血管夹阻断大鼠腹腔干及肠系膜上动脉30 min,然后去除血管夹再灌注6 h,建立大鼠胰腺缺血/再灌注损伤模型.对各组胰腺组织进行VEGF免疫组化染色及TUNEL法细胞凋亡检测.结果 缺血/再灌注损伤后胰腺组织出现细胞凋亡,同时VEGF蛋白表达上调.缺血/再灌注损伤+VEGF反义寡核苷酸组的胰腺组织VEGF蛋白表达较缺血/再灌注损伤组显著减少(P<0.05),前者细胞凋亡指数较后者明显升高(P<0.05).结论 VEGF能抑制缺血/再灌注损伤胰腺细胞凋亡,可能对胰腺缺血再灌注损伤具有保护作用.
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干预VEGF转录抑制鼻咽癌细胞生长、转移及其分子机制研究
目的 以特异性siRNA在转录水平下调VEFG表达,观察对人鼻咽癌细胞株(CNE2)生长、转移等生物学活性的影响并探讨其可能分子机制.方法 构建和筛选VEGF-siRNA高效干扰质粒并测序鉴定,转染研究细胞株,观察干预VEGF表达对鼻咽癌细胞增殖、细胞周期及转移的影响.结果 以siRNA转染CNE2细胞,VEGF在基因转录和蛋白水平表达明显降低,癌细胞增殖明显受抑并呈时间依赖性;干预组癌细胞平板克隆形成能力明显降低、细胞失巢凋亡率显著增加,癌细胞增殖周期发生G1期阻滞,CyclinD1及p-Erk表达降低.结论 干预VEGF基因转录可经Erk/MAPK信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖等生物学行为,提示VEGF为潜在的鼻咽癌基因治疗的有效靶目标.
