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CCR4表达与胆囊癌细胞GBC-SD侵袭和转移的关系
目的：探讨趋化因子CCR4对人胆囊癌细胞GBC-SD增殖、周期、侵袭和迁移运动能力的影响。方法应用Western b1ot法检测人不同胆囊癌细胞株中CCR4的表达水平；慢病毒感染胆囊癌细胞GBC-SD；siRNA-CCR4沉默CCR4基因；Western b1ot法鉴定干扰效果。胆囊癌细胞GBC-SD分为三组：GBC-SD、GBC-SD/CCR4-RNAi和GBC-SD/contro1细胞，CCR4配体CCL17对这三组细胞进行作用。采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期；Transwe11小室运动侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力；Western b1ot法检测CCR4基因沉默后，对其相应配体CCL17和CCL22蛋白表达的影响。结果沉默CCR4基因，对胆囊癌细胞GBC-SD的细胞周期及增殖均无影响，但能显著抑制GBC-SD细胞的侵袭及运动迁移能力，CCR4基因的沉默对肿瘤细胞CCL17和CCL22基因的表达无影响。结论胆囊癌细胞GBC-SD表达趋化因子受体CCR4，CCR4可以促进胆囊癌细胞GBC-SD的侵袭和转移。
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Sema4D介导的IRS-1信号通路在抑制成骨细胞分化中的作用机制研究
目的 通过siRNA干扰技术沉默轴突导向因子4D (Sema4D)基因,探讨Sema4D基因对成骨细胞分化的影响.方法 采用RT-PCR、细胞免疫荧光法和Western blot测定Sema4D基因表达情况,分析沉默效率;采用ALP染色、VonKossa染色及ALP活性观测成骨细胞分化.结果 siRNA干扰技术下调了Sema4D的表达,成功构建了Sema4D基因沉默体系;Sema4D siRNA中成骨细胞的分化明显增强,出现了一定程度的钙化.结论 沉默Sema4D基因与成骨细胞的分化有关.
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佛手提取物调控CYP7A1蛋白表达的研究
目的 探讨佛手提取物(Finger Citron extract)对HepG2细胞中胆固醇7 α羟化酶(CYP7A1)及其核转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体oα(PPARd)和肝核因子4α(HNF4α)的蛋白表达量的影响.方法 采用MTT法得出佛手提取物对HepG2细胞生长无明显抑制的浓度,Western blot检测CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量:采用siRNA干扰技术沉默调控因子PPARα后,观察佛手提取物对CYP7A1的蛋白表达的影响.结果 佛手提取物浓度为0.2、1、5、25 μg/mL对HepG2细胞无明显的抑制作用,且均能上调CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量,沉默调控因子PPARα后,CYP7A1的蛋白表达量显著下降.结论 佛手提取物具有一定的降脂作用,其机制可能与其上调PPARo的表达来上调CYP7A1的表达有关.
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siRNA干扰技术对沉默CKIP-1基因大鼠进展性牙周炎影响的研究
目的:通过siRNA干扰技术沉默络蛋白激酶2-作用蛋白1(CKIP-1)基因,以观察其对大鼠牙周炎发生发展的影响.方法:取SPF级SD大鼠9只,并将其随机分为空白对照组(BC组)、阴性对照组(NC组)、阳性对照组(PC组)(n=3).其中NC、PC两组均采用双侧上颌第二磨牙细线结扎和注射LPS-PG的方法建立牙周炎模型,并在造模期间对PC组注射CKIP-1 siRNA干扰;NC组注射生理盐水作为对照.造模加干预4周后,分别对所有大鼠的双侧上颌骨进行Micro-CT扫描,分析其骨缺损高度和根分叉处牙槽骨体积的变化;然后再取其双侧上颌骨标本并制作近远中向牙周牙体组织联合切片,常规HE染色观察其牙槽骨破坏及牙周组织炎症反应情况.结果:Micro-CT扫描显示:NC组的骨缺损程度大于PC组,其牙槽骨吸收高度(mm)分别为0.9606±0.1112、0.6759±0.0514,根分叉处牙槽骨体积(％)分别为0.5958±0.014、0.7509±0.0355(P＜0.05).组织学观察显示:相比于PC组,NC组大鼠的牙槽骨吸收更明显,且牙周膜纤维排序紊乱.结论:通过siRNA干扰技术沉默CKIP-1基因后,可减少大鼠牙周炎模型的骨缺损破坏程度及炎症反应.
