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肝胆汁酸合成及转运异常在大鼠结肠炎性胆汁淤积发病中的作用
目的 研究肝胆汁酸合成及转运异常在结肠炎性胆汁淤积发生中的作用及其机制.方法 按照体重将Wistar雄性大鼠随机分成2组:正常组和模型组.模型组大鼠给予2,4,6-三硝基苯磺酸结肠灌注制备溃疡性结肠炎(UC)模型,正常组大鼠结肠给予0.9％ NaCl.考察动物的病变活动指数、病理组织评分及髓过氧化物酶活性;测定动物的血清碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量;以液质联用技术测定肝总胆汁酸、脱氧胆酸及石胆酸含量;用免疫印迹技术测定肝中胆汁酸合成限速酶胆固醇7α羟化酶(Cyp7a1)及胆汁酸外排转运体多药耐药性相关蛋白2(Mrp2)的表达.结果 与正常组比较,模型组病变活动指数、病理组织评分及髓过氧化物酶活性分别为4.51 ±1.49,(1.36 ±0.69)分和(0.40±0.07)U·mg-1,差异均有统计学意义(均P＜0.05),说明UC模型制备成功.模型组大鼠肝总胆汁酸及脱氧胆酸含量分别为(85.50±18.60) μmol·L-1和(79.53±32.99) ng·g-1,血清ALP和GGT水平分别为(259.43±58.58),(1.50±0.68)U·L-1,与正常组比较差异均有统计学意义(均P ＜0.05),提示模型组大鼠存在肝内胆汁淤积.与正常组相比,模型组大鼠肝Cyp7a1的表达灰度值为0.72±0.07;而转运体Mrp2的表达灰度值为0.66±0.04;与正常组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 模型组大鼠存在明显的肝内胆汁淤积,其发生与肝胆汁酸合成增多及胆汁酸外排减少有关.
关键词： 溃疡性结肠炎 胆汁淤积 胆固醇7α羟化酶 多药耐药性相关蛋白2 -
雌激素受体及胆汁酸代谢相关基因在胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达
目的 探讨雌激素受体(estrogen receptor,ERα)与胆汁酸代谢相关基因胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、胆固醇27α羟化酶(cholesterol 27-hydroxylase,CYP27A1)、胆固醇12α羟化酶(cholesterol 12α-hydroxylase,CYP8B1)mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达及其意义.方法 将60只清洁级SD孕鼠自孕第13天均分为2组:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0 mL*kg-1*d-1;研究组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg*kg-1*d-1.2组孕鼠分别于妊娠第13、17、21天断尾采母鼠血2 mL检测血清生物化学指标,于妊娠第21天处死.抽取母鼠、胎鼠血并提取母鼠、胎鼠肝脏组织.应用酶联免疫吸附试验检测2组孕鼠以及胎鼠血清中胆酸浓度;应用实时定量PCR技术检测各组胎鼠肝脏ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的mRNA表达量.结果 ①胆酸指标比较:在妊娠第17天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(24.6±1.3)μmol/L、(58.7±3.2)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度明显高于对照组(t=2.462,P<0.05);在妊娠第21天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(26.5±3.1)μmol/L、(66.4±2.7)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度与妊娠第17天时研究组以及对照组相比(F=5.43,P<0.05),差异有统计学意义.②胎鼠肝脏CYP7A1 mRNA、CYP27A1 mRNA、CYP8B1 mRNA表达:研究组中CYP7A1 mRNA(1.25±0.01)、CYP27A1 mRNA(2.05±0.03)、CYP8B1 mRNA明显高于对照组(0.35±0.02、0.75±0.03、0.85±0.02),P值均<0.05,差异有统计学意义.③胎鼠肝脏雌激素受体的表达:研究组中ERα mRNA(0.75±0.02)明显高于对照组ERα mRNA(0.45±0.01).结论 妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠胎鼠肝细胞ER、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的表达升高,胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍,可能是导致ICP胎儿围生期死亡发生的原因之一.
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消痰化瘀中药对NAFLD大鼠肝脏LXRα和CYP7A1表达的影响
目的：观察消痰化瘀中药对NAFLD大鼠脂质代谢和肝脏LXRα和CYP7A1mRNA表达的的影响，探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分正常组、模型组、东宝肝泰对照组以及消痰化瘀中药高、中、低剂量组，一边造模一边灌胃给予相应药物，用药8周后，检测各组大鼠血清TC、TG、HDL、LDL、FFA和肝组织中TC、TG的含量改变，并观察肝组织LXR和CYP7A1mRNA表达变化以及肝组织形态学的变化。结果消瘀化痰中药能降低模型大鼠TC、TG、FFA、ALT、AST的含量或活性，促使LXRα和CYP7A1mRNA的表达上调，改善肝组织的病变程度。结论消痰化瘀中药治疗NAFLD的作用机制可能与增强LXRα和CYP7A1mRNA的表达，促进脂质转运和胆固醇代谢、排泄有关。
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27HC代谢酶与乳腺癌预后因素相关性研究
目的:探讨乳腺癌患者血浆胆固醇27-羟化酶(CYP27A1)和胆固醇7α羟化酶(CYP7B1)浓度与乳腺癌临床分期、组织学分级、Ki-67等预后因素的相关性.方法:观察分析了34例乳腺癌患者血浆CYP27A1和CYP7B1浓度,及其与血清总胆固醇、乳腺癌临床分期、组织学分级、Ki-67等指标的关系.结果:34例乳腺癌患者中,总胆固醇升高者16例,总胆固醇水平正常者18例,血清总胆固醇升高的乳腺癌患者,其血浆CYP27A1酶浓度较总胆固醇正常患者高(P＜0.05),而CYP7B1酶浓度明显低于总胆固醇正常患者(P＜0.01).Ki-67高表达乳腺癌患者血中27HC合成酶CYP27A1水平较Ki-67低表达者高(P＜0.05);而27HC降解酶CYP7B1水平与Ki-67水平的关系则正好相反.临床Ⅰ期乳腺癌患者血浆CYP27A1浓度明显低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,与之相反,CYP7B1浓度却高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者,结果均有显著性差异(P＜0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者间血浆CYP27A1、CYP7B1浓度无显著性差异(P＞0.05).组织学分级间亦有类似的结果.结论:Ki-67低表达、分化好的早期乳腺癌患者,其血浆CYP27A1水平偏低,CYP7B1水平较高,27HC代谢酶与乳腺癌预后因素具有一定的相关.
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升清胶囊对豚鼠胆石病相关基因的影响
目的:探讨中药升清胶囊在分子层面防治胆石病的机制.方法:雌性豚鼠60只,随机分成正常组(喂正常饮食作为对照)、模型组(喂低蛋白饮食致石)和中药组(喂低蛋白饮食致石加中药升清胶囊治疗).6周后处死并取材,观察动物成石情况,检测肝组织胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(bilirubin UDP-glucuronosyltransferase, B-UGT)mRNA及胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase, CYP7A1)mRNA表达.结果:各组豚鼠成石比例分别为正常组2/14、模型组为9/11、中药组为4/14,组间有显著差异(P＜0.05),正常组和中药组豚鼠的肝组织B-UGT mRNA及CYP7A1 mRNA表达明显高于模型组(P＜0.05).结论:中药升清胶囊可能是通过上调肝组织中B-UGT mRNA和CYP7A1 mRNA的表达,干预胆红素和胆固醇代谢,抑制致石性胆汁形成,起到预防胆结石的作用.
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中国上海人群中胆固醇7α-羟化酶基因多态性与高低密度脂蛋白胆固醇血症的关系研究
目的:探讨上海地区中国人胆固醇7α-羟化酶(CYP7)基因多态性与血低密度脂蛋白胆固醇间的关系.方法:研究包括上海地区中体重指数大于25的肥胖者68例,健康体检的体重正常人92例.以限制性片段长度多态性(RFLP)的方法进行分析CYP7基因翻译起始位点上游278bp处C→A替换多态性,同时检测血清胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇和甘油三脂浓度.结果:肥胖和非肥胖者该多态性基因型分布无差异.CC纯合子较AC杂合子有较高的血清LDL-C水平和较高的高LDL-C血症的发生率.结论:CYP7的基因多态性是决定血清LDL-C水平的一个遗传因素.
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高胆固醇摄入对新西兰兔胆汁酸代谢的影响
目的 观察2周高胆固醇食物摄入对新西兰兔胆汁酸经典合成途径基因调节的影响.方法 20只新西兰兔随机分为对照组和高胆固醇组,分别喂饲普通兔粮及高胆固醇兔粮2周,测定实验前后血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、胆汁酸(bile acid,BA)及肝脏胆固醇7α羟化酶(cholesteral 7α-hydroxylase, CYP7A1)活性及mRNA、小分子异源二聚体伴侣(short heterodimer partner,SHP) mRNA、胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP) mRNA和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1) mRNA、胆固醇酯转移蛋白(cholesteryl-ester transfer protein,CETP) mRNA.结果 高胆固醇组TC、LDL、BA均较对照组升高(P<0.05);高胆固醇组CYP7A1活性及mRNA均较对照组降低(P<0.05);高胆固醇组SHP mRNA、BSEP mRNA均较对照组升高(P<0.05);胆固醇组ABCA1 mRNA、CETP mRNA均较对照组升高.结论 高胆固醇摄入后肝脏FXR、LXR受体均被激活,CYP7A1活性下降,胆汁酸经典合成减少.
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加减益肝化石汤阻止取石术后胆石复发作用的观察及对胆汁成石基因的影响
[目的]观察益肝化石汤预防胆总管结石患者经内镜逆行胰胆管造影(encoscopicretrograde cholangiopancreatography,ERCP)+十二指肠乳头切开取石术后胆石复发的疗效,及其对胆汁成石基因血胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(B-UGT)与胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)的影响.[方法]入选对象700例,均为ERCP乳头切开取石成功患者.研究分为两部分:①将600例随机分为A、B组,每组300例.A组口服中药益肝化石汤100ml,2次/d,每月服用不少于6～7剂,每年服药不少于70剂；B组未服任何药物.2组同时进行随访,随访时间6～60(平均48)个月,每半年或出现腹痛症状时经腹部B超、CT、磁共振胰胆管造影复查；以失访和治疗依从性差为截尾,采用Kaplan-Meier法进行复发概率分析2组结石复发率.②将100例随机分成C、D组各50例.C组在常规治疗基础上,加服益肝化石汤；D组仅给予常规治疗.检测并比较2组服药前、服药后第7天、1个月血B-UGT、CYP7A1mRNA的表达.[结果]①A组有19例复发,B组有33例复发,2组术后结石累计复发概率分别是6.3％和11.0％,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).②成石基因检测显示,C组治疗后血中B-UGT、CYP7A1mRNA蛋白表达较治疗前明显升高(P＜0.05),D组治疗前后两基因及蛋白表达无变化.[结论]益肝化石汤辨证施治可有效预防ERCP取石术后患者的胆石症复发,其机制可能是通过上调B-UGT、CYP7A1mRNA表达,抑制成石性胆汁的形成.
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烟酸对小鼠体内胆固醇逆转运的影响及其机制
目的 观察烟酸干预后对小鼠体内胆固醇逆转运的影响,并探讨其机制.方法 14只C57BL/6小鼠随机分为两组,分别给予普通饲料、烟酸添加饲料喂养4周后,腹腔注射经乙酰化-低密度脂蛋白及3H-胆固醇处理过的小鼠巨噬细胞悬液(0.5 mL/鼠,细胞数为5.0×106),单独笼养24 h后测定粪便中的3H-胆固醇含量(占注射总量的百分比);逆转录聚合酶链反应测定小鼠肝脏和小肠三磷酸腺苷结合盒转运体G5、肝X受体α mRNA及肝脏胆固醇7α羟化酶 mRNA 表达并用Western blot印迹检测肝脏和小肠的三磷酸腺苷结合盒转运体G5和肝X受体α蛋白表达.结果 与对照组比较,烟酸组小鼠肝脏和小肠的三磷酸腺苷结合盒转运体G5、肝X受体α,肝脏胆固醇7α羟化酶 mRNA水平和肝肠的三磷酸腺苷结合盒转运体G5、肝X受体α蛋白质水平均增高,粪便中的胆固醇流出率增加21%.结论 烟酸可能通过上调体内肝X受体α,从而刺激三磷酸腺苷结合盒转运体G5、胆固醇7α羟化酶表达来发挥促进小鼠体内胆固醇逆转运作用.
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佛手提取物调控CYP7A1蛋白表达的研究
目的 探讨佛手提取物(Finger Citron extract)对HepG2细胞中胆固醇7 α羟化酶(CYP7A1)及其核转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体oα(PPARd)和肝核因子4α(HNF4α)的蛋白表达量的影响.方法 采用MTT法得出佛手提取物对HepG2细胞生长无明显抑制的浓度,Western blot检测CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量:采用siRNA干扰技术沉默调控因子PPARα后,观察佛手提取物对CYP7A1的蛋白表达的影响.结果 佛手提取物浓度为0.2、1、5、25 μg/mL对HepG2细胞无明显的抑制作用,且均能上调CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量,沉默调控因子PPARα后,CYP7A1的蛋白表达量显著下降.结论 佛手提取物具有一定的降脂作用,其机制可能与其上调PPARo的表达来上调CYP7A1的表达有关.
