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实时定量RT-PCR检测肝癌miRNA表达中内参的选择
目的 探讨肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织采用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)技术检测miRNA表达佳内参的选择.方法 采用实时RT-qPCR技术检测7个内参RNU6B、RNU48、RNU66、RNU44、RNU43、5s rRNA和18s rRNA在70例HCC及相应癌旁肝组织中的表达.并使用NormFinder及geNorm软件分析优化的内参.结果 7个内参表达结果存在差异.NormFinder及geNorm软件均显示RNU6B+RNU48组合为肝组织的佳内参.结论 使用实时定量RT-qPCR研究目标miRNA相对定量表达时,为保证数据的精确性和客观性,在实验前对内参进行慎重的筛选是必不可少的.NormFinder及geNorm软件可用于各种实验因素下适宜内参的选择.
关键词： 肝肿瘤 miRNA 内参 实时定量RT-PCR NormFinder geNorm -
肝癌实时定量RT-PCR中适宜内参基因的选择
目的 探计肝癌(HCC)组织及细胞系实时定量RT-PCR佳的内参基因选择.方法 通过实时定量RT-PCR,检测HMBS、CTBP1、HPRT1、UBC、B2M、SDHA、RPLI3A、EIF4A1、TUBB、YWHAZ、ACTB、GUSB、GAPDH、18 s rRNA和28 s rRNA 15个内参基因在70例HCC、癌旁肝组织及阿法替尼作用后4个HCC细胞系的表达情况.并使用NormFinder及geNorm软件分析优化的内参基因.结果 15个内参基因表达存在差异,Cq值在8～29.2间.GAPDH在HCC及癌旁肝组织表达差异有显著性(P＜0.05).结论 NormFinder及geNorm软件均显示HMBS+UBC组合为肝组织的佳内参,HMBS+ RPLI3A组合为体外肝癌细胞系的适宜内参.
关键词： 实时定量RT-PCR 内参基因 肝癌 NormFinder geNorm -
小鼠哮喘模型颈静脉-结状神经节内参基因的筛选
目的 观察12个常用看家基因在正常小鼠和哮喘小鼠颈静脉-结状神经节的表达变化, 选择合适的内参基因为进一步基因表达分析研究得到可信数据提供依据.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组和对照组,制备哮喘模型,用实时荧光定量PCR技术,经geNorm及Normfinder程序分析,评价了12个常用看家基因CYC1、UBC、RPL13、YWHAZ、18srRNA、B2M、SDHA、ATP5B、CANX、ACTB、EIF4A2和GAPDH在小鼠颈-结状神经节的表达稳定性. 结果 12个候选看家基因在小鼠神经节的表达差异较大,其中GAPDH、18srRNA、CANX、ACTB和EIF4A2表达相对稳定,而CYC1、UBC和RPL13的表达在两组小鼠神经节变化幅度较大,结合两种分析证实GAPDH是其中稳定的内参基因. 结论 本研究结果提示GAPDH是研究哮喘小鼠和正常小鼠颈静脉-结状神经节基因表达的佳内参基因,同时也为进一步认识在不同实验模型确定适宜内参基因的重要性提供依据.
