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单个卵裂球荧光原位杂交标本前处理的研究
目的 建立一种简单有效的单细胞荧光原位杂交前单个细胞的定位和查找技术,促进胚胎种植前遗传学诊断方法的应用.方法 卵裂球在玻片上固定后被随机分为2组,一组直接应用FISH检测X、Y染色体;另一组先用瑞氏染色法染片,在荧光显微镜下查找单个细胞,乙醇脱色,再进行FISH杂交,杂交后查找X、Y染色体信号.比较两种方法核和荧光信号检出率.结果 直接查找法和瑞氏染色定标法核的检出率分别为81.3%(39/45)和83.3%(45/54),两者核检出率的差异无显著性;信号检出率分别为70.8%(34/45)和74.1%(40/54),两者检出率的差异无显著性.结论 瑞氏染色定标法在单细胞荧光原位杂交前标本的查找中简单、方便可行.
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废弃胚胎来源的单个卵裂球的发育规律
目的 通过对单个卵裂球的体外培养发育的观察,评估其细胞增殖、囊胚形成以及细胞发育分化.方法 收集临床体外受精周期中第3天新鲜废弃胚胎,分离单个卵裂球后即移至囊胚培养液中培养.观察卵裂球的生长情况,分析体外发育单个卵裂球的增殖情况、囊胚的形成时间以及效率,并对形成的囊胚进行细胞染色计数,总结单个卵裂球体外培养的发育规律;并且通过免疫荧光检测囊胚的多能性标记物Oct3/4的表达,初步探讨单个卵裂球的发育极性.结果 收集第3天新鲜废弃胚胎,共分离并进入研究的单个卵裂球596个,卵裂球形成细胞融合在分离后的48 h,囊胚形成则在分离后的72 h,而且生成的囊胚体积较小,大部分内细胞团结构不明显,卵裂球增殖率分别34.1％;囊胚形成率为8.6％,而同期收集的废弃胚胎的囊胚形成率为28.7％,组间差异有统计学意义(P ＜0.001);对分离卵裂球培养第4天形成的囊胚进行细胞计数,中位细胞数为24.6;对所形成的囊胚分析Oct3/4的表达发现,只有25.0％囊胚可表达多能性标志物(Oct3/4),而且囊胚表达多能性标记物的细胞数很少(2～5个).结论 普通胚胎发育规律比较,单个卵裂球的囊胚形成时间延迟1d,囊胚形成率较未分离的废弃胚胎低下;而且单个卵裂球的分离培养可能对细胞的全能性或者极性发育存在负面的影响.
