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流式细胞术产前非侵入性定量检测胎-母出血的研究
目的建立产前非侵入性定量检测RhD阴性孕妇胎-母出血的流式细胞术实验方法.方法 RhD阴性红细胞与RhD阳性红细胞按一定比例混合,用抗-D作为一抗结合D+红细胞,以羊抗人IgGF(ab′)2-FITC作为二抗,连接抗-D,应用流式细胞术检测D+红细胞占D-红细胞的比例,建立抗-D及抗人IgGF(ab′)2-FITC的量效关系,确定两者佳使用剂量.在此实验条件下,进行流式细胞术检测值与实际值的相关性分析,判定可以检测出的D-红细胞中混有D+红细胞的准确出血量范围,应用建立的流式细胞术方法测定9例RhD阴性孕妇外周血中的胎-母出血量.结果抗-D的有效使用剂量为1∶400稀释,100 μl/5×106细胞;羊抗人IgGF(ab′)2-FITC的有效使用剂量为2.5 μg/5×106细胞;流式细胞术测定比例与已知实际比例的相关系数r=0.998;准确检测的胎-母出血量为(0.6～30) ml.9例RhD阴性孕妇外周血中除2例未检出D+细胞而无法判断外,其余7例均检测出胎-母出血,胎-母出血量为(1.2～6.48) ml.结论针对孕期发生胎-母出血反应的RhD阴性孕妇,可以应用流式细胞术方法在产前准确无损伤地定量检测胎-母出血量,指导临床预防、治疗Rh新生儿溶血病.
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1例DVI Ⅲ型孕妇的免疫状态和RHD基因分析
目的追踪研究1例弱D表型孕妇(G4P0)的胎母免疫状态和其RHD基因型.方法分别采用聚合酶链式反应(PCR)技术、DNA序列分析技术和流式细胞术.结果序列特异性引物PCR(SSP-PCR)检测RHD第3～7、9～10外显子显示第3～6外显子为阴性;编码区全长序列分析显示第1～2,7～10外显子序列与正常RHD基因-致,其余外显子缺失,证实个例为部分D表型DVI Ⅲ型,其RHD基因型鉴定为CDVIe/cde.流式细胞术分析显示母亲体内存在胎儿红细胞,即胎母出血反应阳性,但血清中未发现抗-D,胎儿出生后无新生儿溶血病(HDN)发生.结论本例虽未发生HDN,但在输血实践及临床抗D同种免疫的预防和监护中,笔者认为仍应将DVI表型个体作为阳性供者和阴性受者.
