首页 > 文献资料
-
膝眼穴针灸对大鼠膝关节软骨细胞表型以及PGC-1α信号通路的影响
目的 研究膝眼穴针灸疗法对膝关节软骨细胞表型改变及其参与线粒体生成氧自由基(ROS)的过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子1α(PGC-1α)信号通路变化的影响.方法 通过免疫组化技术检测膝眼穴针灸后大鼠膝关节软骨细胞表型的主要特征分子指标 (col 1、col 2、aggrecan)以及 PGC-1α、线粒体转录因子A(TFAM)、解耦联蛋白2(UCP 2)和NADPH氧化酶1/4(NOX 1/4)因子的表达变化.进一步检测向大鼠膝关节腔内注射ZN005L(PGC-1α激活剂)激活PGC-1α表达后大鼠软骨细胞表型特征分子指标的表达变化,以及软骨细胞内ROS生成量的改变.结果 对大鼠进行膝眼穴针灸后,PGC-1α表达增加;UCP 2以及软骨细胞表型主要指标aggrecan表达下降.激活PGC-1α表达后,软骨细胞内ROS的生成量降低,并且软骨细胞表型丢失现象被抑制.结论 膝眼穴针灸疗法不能改善大鼠膝关节软骨细胞的功能,相反会促进软骨细胞表型特征分子的丢失,并损害软骨细胞功能.
-
山羊骨髓间充质干细胞分离培养及向软骨细胞诱导分化
目的 探讨体外分离、培养山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs),并将其诱导分化为软骨细胞表型,明确其向软骨细胞分化的能力.方法 抽取10月龄健康中国青山羊骨髓,贴壁法培养BMSCs,体外培养至第4代时进行流式细胞术鉴定,并加入成软骨诱导培养基,其成分包括10% FBS高糖DMEM培养基、6.25 μg/ml 胰岛素、6.25 μg/ml 转铁蛋白、50 μmol/ml抗坏血酸、100 nmol/L地塞米松及10 ng/ml TGF-β1.分别于0、1、2、4周行细胞化学染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹试验(Western blot)检测II型胶原和Aggrecan的表达.结果 山羊BMSCs生长良好,传至第4代时细胞纯度较高.加入诱导培养基后,山羊BMSCs在1、2、4周均可看到软骨细胞表型的表达,并且随着时间的延长,其II型胶原及Aggrecan基因和蛋白的表达量逐渐增加,2周时即可达到较好的诱导效果.结论 本实验采取一种简易的方法 分离、培养并向软骨细胞方向诱导分化山羊BMSCs,证实其具有分化为软骨细胞的潜能,为山羊用于骨软骨组织工程的体内研究提供了实验基础.
关键词： 山羊骨髓间充质干细胞 软骨细胞表型 诱导分化 组织工程 -
成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持
目的 探讨体外诱导成年兔骨髓基质细胞(MSCs)表达并长期保持软骨细胞表型的方法.方法 原代骨髓基质细胞传代后,以含rhTGF-β1、地塞米松、维生素C等的成软骨培养液诱导培养,以倒置相差显微镜观察细胞形态变化,通过甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测诱导的MSCs的软骨细胞表型.诱导的MSCs在体外长期持续或间断以含1ng/ml rhTGF-β1诱导液培养,以单纯DMEM培养为对照,观察细胞传5代后的表型变化.结果 原代培养的MSCs传代后,在成软骨诱导培养后,细胞逐渐由梭形变为多边形,诱导7d后即可表达Ⅱ型胶原,甲苯胺蓝染色阳性.具软骨细胞表型诱导后的MSCs在间断或持续以低浓度rhTGF-β1诱导下长期培养,仍可保持其软骨细胞表型,对照组则表现为成纤维样细胞.结论 成年兔骨髓基质细胞可在体外培养条件现下诱导成软骨细胞,低浓度的TGF-β1可维持诱导的骨髓基质细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原.
