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新型维甲酸衍生物ATPR对肿瘤细胞株SKOV3增殖及分化的影响
目的:探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖及分化作用.方法:ATPR作用于细胞株SKOV3后,MTT法检测细胞的增殖；吉姆萨染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化；ELISA法检测卵巢癌标志物糖链抗原125 (CA125)；流式细胞术检测细胞周期的变化情况.结果:ATPR呈浓度依赖性抑制SK-OV3细胞增殖,明显抑制作用出现在药物作用48 h,但在72 h后则更显著；倒置显微镜下观察发现细胞形态学趋于成熟分化；SKOV3中CA125水平下降；流式细胞仪测定G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期.结论:ATPR对SKOV3细胞具有抑制增殖和一定的诱导分化作用.
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对K562细胞分化和细胞周期的影响
目的 本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对K562细胞株的抑制增殖和诱导分化活性并对其机制进行研究.方法 ATPR作用于K562细胞3 d后,通过MTT法检测细胞的增殖,NBT还原实验法分析细胞的分化指标,瑞氏染色法在油镜下观察加药前后细胞形态学变化,FCM检测分析细胞周期,RT-PCR法检测cyclin E、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6、p21cip1、p27kip1、p57kip2和PCNA mRNA的变化情况.Western blot法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达的改变.结果 ATPR呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖的作用.ATPR诱导分化活性表现为NBT阳性细胞率增加,油镜下观察K562细胞有分化成熟的改变,G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,呈G1期阻滞.RT-PCR检测发现cyclin E、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6表达减少,PCNA、P21cip1、P27kip1改变不明显,P57kip2表达增加.Western blot检测cyclin D1和CDK4蛋白表达减少.结论 ATPR有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其分化的活性,并通过上调P57kip2的表达,抑制Cyclin-CDK激酶复合物,发挥细胞周期阻滞的作用.
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人胃癌SGC-7901细胞的磷酸化蛋白质组学研究
目的：研究观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）作用于胃癌 SGC-7901细胞后蛋白质的磷酸化情况来了解 ATPR 诱导分化作用的可能机制和作用靶点。方法 ATPR 作用于胃癌 SGC7901细胞48 h 后，收集并提取总蛋白，通过胰蛋白酶酶解，TiO2磁珠法富集磷酸肽，高分辨率液质联用仪器检测磷酸肽，使用 Proteome Discoverer1．2软件寻找差异的蛋白质和磷酸化位点，利用生物信息学网站和 DAVID、KEGG、IPA 软件，分析这些磷酸化蛋白质的功能及亚细胞定位等信息。结果终鉴定出109个蛋白质，其中45个磷酸化蛋白质，共有121个磷酸化位点，差异蛋白中有15个仅出现在 ATPR 组，20个仅出现在正常组。DAVID 分析结果显示差异磷酸化的蛋白质参与调控细胞进程、生物进程、基因表达、细胞的代谢过程等；KEGG分析结果显示差异磷酸化蛋白质主要有参与 ERBB 信号通路、RNA 的转运、内质网蛋白加工过程、p53信号通路等。IPA 软件分析一些差异蛋白质之间的关联蛋白是泛素连接酶（UBC）。结论 ATPR 对胃癌细胞 SGC-7901细胞诱导分化的机制可能是通过作用于多种蛋白质或基因，如肝癌衍生生长因子（HDGF）、钙蛋白酶抑制蛋白（CAST）、ATP 结合盒G 亚族蛋白4（ABCG4）和腺苷酸环化酶关联蛋白1（CAP1）而发挥作用，并通过影响这些蛋白质的磷酸化从而实现 AT-PR 对胃癌细胞的诱导分化作用。
关键词： ATPR 人胃癌SGC-7901细胞 诱导分化 磷酸化蛋白质组学 -
RAR β沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯抗SGC-7901细胞增殖作用的影响
目的 制备并筛选有效沉默SGC-7901细胞维甲酸受体β(RARβ)基因的佳siRNA序列,观察RARβ靶向沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)抑制SGC-7901细胞增殖作用的影响.方法 针对人RARβ全序列设计合成3条siRNA,以lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染至SGC-7901细胞.转染后24、48 h应用RT-PCR和Western blot技术分别检测SGC-7901细胞内RARβ的mRNA和蛋白表达.选用佳siRNA序列靶向沉默SGC-7901细胞RARβ后6 h加入ATPR(终浓度为10-5mol·L-1),72 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期动力学,分光光度法检测细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化.结果 靶向沉默SGC-7901细胞中RARβ基因的佳序列为siRNA-RARβ-homo-466且在浓度为100 pm·L-1、与Lipo的比例为1:0.05时沉默效果佳.与未沉默的ATPR给药组比较,RARβ-homo-466序列转染沉默后ATPR(10-5mol·L-1)给药组SGC-7901细胞增殖活性升高,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.01),ALP和LDH活力显著增强(P<0.05).结论 siRNA-RARβ-homo-466可有效沉默RARβ基因的表达;RARβ沉默后,对ATPR敏感的SGC-7901细胞表现出ATPR抗性,提示RARβ可能是介导ATPR作用于SGC-7901细胞的主要环节.
关键词： SGC-7901细胞 维甲酸受体β RNA干扰 ATPR -
新型维甲酸衍生物ATPR体外诱导消化系统肿瘤细胞分化的研究
目的 观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对胃癌细胞株SGC-7901、肝癌细胞株BEL-7402、结肠癌细胞株HT-29的生长和分化的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测细胞的生长抑制率；分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和肝癌细胞分化标志酶LDH、谷酰转肽酶(γ-GT)活性；酶联免疫法检测肝癌细胞标志物甲胎蛋白(AFP)和结肠癌细胞标志物癌胚抗原(CEA)水平；流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果 ATPR呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖；并使SGC-7901中ALP、LDH活性下降,BEL-7402中AFP、LDH、γ-GT水平下降,HT-29中CEA水平升高；G0/G1期细胞表达量增加,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期.结论 ATPR对上述三种实体瘤细胞株具有诱导分化的作用.
