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2型登革病毒文献资料
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新型登革病毒RNA聚合酶小分子抑制剂Z1降低登革病毒复制和感染的研究
目的 筛选新型的登革病毒RNA聚合酶抑制剂.方法 大肠杆菌原核表达DENV2 RNA聚合酶蛋白NS5 RdRp.SPR高通量筛选小分子化合物库,寻找与NS5 RdRp蛋白结合的小分子化合物;CPE、LDH和空斑实验在细胞水平上验证化合物的抗病毒效果;实时荧光定量PCR法检测化合物对病毒RNA合成的影响;免疫荧光法检测病毒复制中间体dsRNA以及病毒蛋白合成;蛋白免疫印迹法检测化合物对病毒蛋白合成量的影响;时间点处理实验判断抗病毒作用阶段.结果 2,5-二氢-1,2-二苯基-4-环己氨基-5-氧代-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(Z1)与NS5 RdRp具有结合活性,在细胞水平上具有抗DENV2活性,半数有效浓度(EC50)为4.75μmol·L-1.Z1抑制DENV2 RNA合成,抑制病毒dsRNA的合成,并抑制病毒蛋白的合成,其抑制作用发生在病毒进入后阶段.结论 Z1是新型的登革病毒NS5 RdRp抑制剂,其明显抑制登革病毒RNA的合成,并进一步抑制病毒蛋白的翻译合成,从而抑制子代病毒的复制和释放,其可作为新型的抗登革病毒先导化合物用于进一步的开发.
关键词： NS5RdRp抑制剂 登革病毒RNA聚合酶 2型登革病毒 抗病毒药物 SPR 病毒复制 -
2型登革病毒核酸疫苗诱导的体液免疫研究
为研究以2型登革病毒NS3基因构建的核酸疫苗能否诱导体液免疫,用表达2型登革病毒NS3的重组真核表达质粒PSV·NS3直接接种Balb/c小鼠.结果发现在接种后2周即可检测到IgM抗体,该抗体在加强接种后滴度显著升高,6周达高水平至少维持2个月;IgG抗体在接种后4周可检测到,8周达高水平至少维持2个月.Western blot证实了接种小鼠血清中有NS3特异性的IgG抗体.这些结果表明我们接种的PSV·NS3能诱导Balb/c小鼠的体液免疫.
