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NUAK1能促进乳腺癌上皮-间质转化的发生引起侵袭转移
目的 探讨NUAK1(NUAK family SNF1-like kinase 1)与上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及乳腺癌侵袭转移之间的关系.方法 应用免疫组织化学染色法检测100例乳腺癌组织及其癌旁正常组织(＞5 cm)中NUAK1、EMT相关蛋白上皮-钙黏素(epithelial-cadherin,E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,并分析其相关性.应用RNAi技术将合成的小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,进行Western blot检测转染成功后,应用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力,再检测转染细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况.结果 浸润性导管癌组织中NUAK1蛋白的表达率明显高于导管内癌和癌旁正常组织(P<0.01);浸润性导管癌中NUAK1蛋白的表达与分化程度、淋巴结转移、远处转移、E-cadherin、Vimentin的表达有关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤的大小、ER、PR及c-erbB-2的表达无关(P>0.05).转染72 h后,与Scr/MDA-MB-231细胞相比,siNUAK1/MDA-MB-231细胞中NUAK1蛋白表达水平明显降低的同时,细胞的体外侵袭能力明显降低(P<0.05).并且伴有Vimentin蛋白表达水平的降低和E-cadherin蛋白表达水平的升高(P<0.05).结论 NUAK1能促进乳腺癌EMT的发生,从而促进乳腺癌的侵袭转移.
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稳定表达siRNA-NUAK1基因95D细胞系的建立
目的 建立稳定表达siRNA-NUAK1基因的人肺巨细胞高转移株95D细胞系,为研究NUAK1在肺癌细胞转移侵袭中的作用机制提供基础.方法 利用脂质体把pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-NUAK1重组质粒转染95D肺癌细胞,G418筛选稳定转染细胞系,从中挑出单克隆,分别通过荧光显微镜和RT-PCR法鉴定单克隆细胞和NUAK1基因的转染、抑制效果.结果 从稳定转染细胞中,成功挑出单细胞克隆3株,其中2株细胞的NUAK1基因的表达被显著抑制.结论 利用siRNA技术成功建立了稳定表达siRNA-NUAK1基因的95D细胞系,为研究NUAK1因子与肺癌转移侵袭的关系及机制提供了细胞模型.
