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哇巴因对心肌细胞钙瞬变及收缩力的作用
目的 检测哇巴因对正常大鼠和阿霉素所致心衰大鼠左心室肌细胞的收缩力、钙瞬变和舒张期钙影响.方法 腹腔注射阿霉素制备大鼠心衰模型,以改良的Langendorff装置分离心肌细胞,负载Fluo-4钙荧光染料后采用IonOptix可视化细胞动缘探测系统检测哇巴因对大鼠心肌细胞收缩功能、舒张期钙及钙瞬变的变化.结果 哇巴因可浓度依赖性增加正常大鼠心肌细胞收缩力和钙瞬变,3×10-7 mol·L-1哇巴因即明显增加收缩力和钙瞬变,但对心衰大鼠心肌细胞,1×10-5 mol·L-1哇巴因才明显增加心肌细胞收缩力和钙瞬变;哇巴因也可增加正常大鼠和心衰大鼠心肌细胞舒张期钙.结论 哇巴因能够增加心肌细胞收缩力、钙瞬变和舒张期钙,阿霉素所致心衰大鼠心肌细胞较正常细胞不敏感.
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应用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4测定H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的[Ca2+]i变化
背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤，Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平，有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用，实时测定胞浆Ca2+浓度（[Ca2+]i），探讨[Ca2+]i与细胞凋亡的关系，并比较两种Ca2+探针在荧光强度及[Ca2+]i测定值方面的差异。方法采用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4负载细胞，1 h后用不同浓度的H2O2刺激细胞，激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果在相同的探针浓度、负载时间和相同的图像采集参数的条件下，选定细胞内fluo-4平均荧光强度高于fluo-3。50 mM H2O2刺激后，A549细胞胞浆内[Ca2+]i迅速升高，通过公式计算发现采用fluo-3探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是112.2 nM-1,069.6 nM，采用lfuo-4探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是7.6 nM-505.4 nM。同时发现经H2O2刺激后，凋亡细胞百分比明显增加（P<0.01）。结论H2O2促进A549细胞内Ca2+释放，诱导细胞凋亡。Ca2+探针lfuo-4可能更适合于监测含量较低的细胞中[Ca2+]i变化。
