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人寡肽转运体1转染 MDCK 细胞与转染 HeLa 细胞的比较研究
目的:筛选出更适宜的转染受体细胞,提高构建人寡肽转运体1(human peptide transporter 1,hPepT1)高表达细胞系的效率。方法利用 LipofectamineTM2000转染试剂将pcDNA3.1(+)-hPepT1质粒分别转染进 MDCK 细胞与 HeLa细胞,并进行单克隆细胞的挑选和扩大培养。通过 qRT-PCR与 Western blot 技术来检测两种受体细胞中 hPepT1 mRNA与蛋白的表达水平,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS /MS)对两种单克隆转染细胞的 hPepT1典型底物甘氨酰肌氨酸(Glysar)摄取能力进行考察。结果MDCK 细胞与 HeLa 细胞转染后,hPepT1 mRNA 与蛋白表达水平以及Glysar 的摄取能力均明显高于其野生型细胞(P <0.05);虽然 Glysar 在 HeLa 细胞中的摄取量高于 MDCK 细胞,但 MD-CK-hPepT1细胞中 hPepT1 mRNA 与蛋白表达水平以及Glysar 的摄取能力却高于 HeLa-hPepT1细胞。结论在hPepT1稳定高表达转染细胞模型的构建中,为提高 hPepT1的转染效率,从而获得更高效的转染细胞模型,以 MDCK 细胞作为转染的受体细胞可能是更为适宜的选择。