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反相高效液相色谱法检测小鼠血浆中FG020326方法的建立
目的 建立测定多药耐药(multidrug resistance,MDR)逆转剂FG020326在KM小鼠血浆中血药浓度的方法.方法 将KM小鼠(20.0～25.1)g随机分组,每组6只,♀♂各半,尾静脉注射,给药量为30 mg·kg-1,分时取血、处理.采用反相色谱柱,应用外标法测定FG020326在KM小鼠血浆中的血药浓度.结果 在所建立的方法学下,FG020326的保留时间为7.9 min;标准曲线为=0.0144X-0.0285(r=0.9998),在162.5～41 600μg·L-1血浆浓度范围内呈良好的线性关系,低检测浓度40 μg·L-1(S/N=3);在650、2 600、20 800 μg·L-1低、中、高3个浓度下的绝对回收率为68.66%～84.63%,相对回收率为92.58%～110.88%;日内及日间RSD均小于3.2%(n=5).在室温及冷冻-解冻试验中,FG020326具有良好的稳定性,RSD分别小于1.3%和6.0%.尾静脉单次给药后,FG020326在体内过程符合二室模型,T(1)/(2)α为0.088 h ,T(1)/(2)β为5.33 h,AUC0～∝为14 183 h·μg·L-1,Vd为0.37 L.结论 该方法快速、准确、简便,能够满足FG020326药代动力学研究要求.
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FG020326通过增加泰素帝介导caspase-8和3激活的敏感性克服多药耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡抗性
背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)的主要特征是具有药泵功能的P-gp的高表达,近来研究发现P-gp还抑制caspase依赖方式凋亡,使MDR细胞免于多种形式的caspase依赖性凋亡.本研究拟探讨新型化合物FG020326对耐药细胞MCF-7/ADR的细胞毒作用,克服MCF-7/ADR对泰素帝的凋亡抵抗作用及机制.方法:MTT法测定FG020326体外逆转活性,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡通路PARP、caspase-3、caspase-8的表达,并用比色法测定caspase-8和3的活性.结果:10μmol/LFG020326作用下MCF-7/ADR细胞对泰素帝耐药性逆转了24倍.10μmol/LFG020326作用下,0.1 μmol/L泰素帝可诱导MCF-7/ADR细胞染色质凝集,凋亡小体产生以及出现亚凋亡峰.10 μmol/L FG020326作用48 h,泰素帝介导的caspase激活敏感性增加,0.1μmol/L泰素帝诱导下出现caspase-8和caspase-3,PARP裂解.与0.1 μmol/L泰素帝单独作用相比,10μmol/L FG020326作用下,泰素帝介导的caspase-8和caspase-3活性显著提高,并呈时间依赖性,48 h活性高.结论:新型化合物FG020326可显著逆转MCF-7/ADR对泰素帝的抗药性,通过增加泰素帝介导的caspase-8和caspase-3的激活敏感性克服MDR细胞MCF-7/ADR的凋亡抗性.
