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TGF-β1诱导肺切片纤维化模型的建立
目的建立转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导肺切片纤维化模型,为肺纤维化病理机制和治疗药物的研究提供实验基础.方法 0.4 %的琼脂糖充盈肺组织,切片,于肺切片培养的1、3、5、7、9 d以LDH漏出值和MTT比色法观察肺切片存活情况.以羟脯氨酸(HYP)为指标从时效和量效两个方面确定TGF-β1诱导肺切片纤维化的亚适时间点和亚适剂量.肺组织进行HE和Masson染色以确定肺纤维化是否形成.结果在本实验条件下,培养的肺切片可存活9 d.通过HYP和组织学检查确定TGF-β1诱导肺切片纤维化的亚适时间点和亚适剂量分别为7 d和2.5 μg·L-1.另外,氢化可的松对TGF-β1诱导肺切片纤维化无明显影响.结论 TGF-β1(2.5 μg·L-1,×7 d)可诱导肺切片纤维化,氢化可的松对此无明显影响.
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精密肺切片方法学的建立及中性红比色法检测肺切片活力的有效性
目的建立精密肺切片方法学,探讨中性红比色法检测肺切片活力的有效性.方法 1%低熔琼脂糖充盈肺组织,振荡切片机切片,厚度分别为400、500、600、700 μm, 培养液pH分别为6.8、7.0、7.2、7.4,预培养1 h,于24孔培养板持续浸润培养0、2、4、6 h,以中性红比色法,MTT比色法,乳酸脱氢酶漏出率,超氧化物歧化酶活力为检测手段确定肺切片适制备培养条件.结果肺切片厚600 μm,培养液pH 7.0时,活力保持佳,可稳定维持6 h;不同厚度肺切片中性红摄取率与MTT还原量呈正相关(r1 = 0.91,P< 0.05),不同pH培养液培养的肺切片中性红摄取率与MTT还原量呈正相关(r2=0.98,P<0.01).结论精密肺切片是简便可行、有待发展的新型体外模型,中性红比色法操作简便,结果稳定,灵敏准确,可作为肺切片活力判定指标.
