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miR-210促进小鼠BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌
目的 通过体内与体外的手段验证miR-210能够有效的促进骨髓间充质干细胞(BMMSCs)血管内皮生长因子(VEGF)的表达和分泌.方法 构建慢病毒载体,分别转染BMMSCs和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),Lenti-miR-210/BMMSCs和Lenti-LacZ/BMMSCs培养第7天RT-PCR法检测VEGF表达,第14天Western blot法检测VEGF表达,PKH26荧光染色Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-LacZ/HUVEC,Matrigel成管实验24 h,荧光显微镜观察成管效果;agomir-210和agomir-NC分别与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后取标本CD31免疫荧光染色.结果 miR-210慢病毒载体转染BMMSCs,第7天RT-PCR和第14天Western blot法检测VEGF表达,明显高于Lenti-LacZ/BMMSCs(P ＜0.05);Matrigel成管实验24 h结果显示:LentimiR-210/HUVEC组与Lenti-LacZ/HUVEC组相比,端端接触明显且管状结构完整;agomir-210和agomir-NC与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后标本CD31免疫荧光染色结果:agomir-210组CD31阳性细胞含量明显高于agomir-NC组.结论 通过体内与体外的检测,miR-210过表达能够有效促进BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌.
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Zmpste24-/-小鼠骨髓间充质干细胞的增殖凋亡及其TRP通道的表达研究
目的:探讨Zmpste24--小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的增殖凋亡情况及瞬时性受体电位通道(TRP通道)表达水平与野生型(WT)小鼠的区别.方法:体外分离培养4月龄Zmpste24-/-和WT小鼠的BMMSCs,经干细胞表面分子鉴定后,分别采用β-半乳糖苷酶试剂盒检测两种小鼠细胞的衰老情况;流式细胞仪检测小鼠细胞的增殖、凋亡情况;实时定量RT-PCR检测两种小鼠细胞的TRP通道表达水平;激光共聚焦显微镜检测两种小鼠的细胞内Ca2+浓度.结果:Zmpste24-/-和WT小鼠的BMMSCs均阳性表达Sea-1,阴性表达CD34、CD45.Zmpste24-/-小鼠BMMSCs的衰老细胞数目和凋亡水平明显高于WT小鼠(P＜0.05),而其增殖能力则明显低于WT小鼠(P ＜0.05);TRPC1、TRPM4、TRPM8、TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV5通道的表达水平均明显高于WT小鼠(P＜0.05);胞内Ca2+浓度明显高于WT小鼠(P＜0.05).结论:Zmpste24-/-小鼠BMMSCs的增殖率降低、凋亡率升高可能与其TRP通道高表达、胞内钙离子浓度升高有关.
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自然衰老小鼠骨髓间充质干细胞增龄性改变的研究
目的:探讨自然衰老小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)在衰老过程中生物学特点的改变.方法:分离、培养年轻(2月龄)、年老(16月龄)C57/BL6J小鼠的BMMSCs,经干细胞表面分子鉴定后,Western Blot检测2组BMMSCs的Tert、Acetyl-P53蛋白表达水平;氧化应激活性氧(ROS)试剂盒检测ROS表达水平;流式细胞仪检测并比较两组细胞的增殖、凋亡状态.结果:年轻、年老小鼠BMMSCs阳性表达Sca-1,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞表达特性;年老小鼠BMMSCs Tert 蛋白表达水平明显低于年轻组(P＜0.05),Acetyl-P53蛋白表达水平明显高于年轻组(P＜0.05);年老细胞ROS表达水平明显高于年轻组;年老细胞的增殖能力明显低于年轻组(P＜0.05),而凋亡水平则明显高于年轻组(P＜0.05).结论:年老小鼠BMMSCs出现增龄性变化,这些变化可能在骨衰老中起着重要作用.
