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粉尘螨第24组过敏原cDNA克隆表达及其免疫学特性的研究
目的 克隆表达粉尘螨第24组过敏原eDNA,研究其免疫学特性,为深入研究尘螨致敏机制提供基础.方法 以粉尘螨cDNA文库为模板,根据Der f24基因序列(GenBank Accession No.KC669700)设计引物,PCR扩增Der f24 cDNA,构建原核表达载体pET-His-Derf24,并经酶切鉴定和DNA测序,转化至E.coli BL21(DE3) plysS,用异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达;重组产物经Ni2螯合层析纯化,获得重组的Der f24(14 kDa);对重组蛋白进行IgE-Western blotting(WB)实验和IgE-ELISA实验;通过Swiss-model软件模拟Der f24的3D结构并通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞表位,合成三个肽(位置分别为75-88 aa、44 57 aa和104 117 aa)进行IgE-ELISA实验.结果 克隆的Der f24基因cDNA序列全长为357 bp,编码118个氨基酸(GenBank Accession No.KP064571);Der f24原核表达主要形式为不可溶的包涵体,纯化后的重组Der f24蛋白分子量约为14 kDa.IgE-WB结果显示,重组Der f24与10例粉尘螨过敏患者血清呈强阳性反应,而与10例健康对照组均为阴性.IgE-ELISA结果显示,合成表位肽(No.1 75-88 aa:Z=5.6734、No.2 44-57 aa:Z=5.6720和No.3 104-117 aa:Z=5.6791;P＜0.0001)均与22例粉尘螨过敏患者血清呈阳性反应,而与22例健康对照组血清呈阴性反应.结论 本研究成功克隆表达了Der f24 cDNA,重组Der f24可结合粉尘螨过敏血清IgE,鉴定了3个潜在的IgE B细胞表位.本研究为进一步防治螨性过敏性疾病奠定了技术基础.
