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斯氏并殖吸虫线粒体Cytb基因的扩增、测序以及遗传进化分析
目的 扩增出斯氏并殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因片段并测序,分析该基因对吸虫遗传分类的意义.方法 提取斯氏并殖吸虫成虫基因组DNA,PCR扩增线粒体Cytb基因,克隆质粒并测序.在NCBI的GeneBank中作相似性和同源性检索,用DNAsis等软件分析这些吸虫的线粒体Cytb基因,采用大简约法(MP)和邻位相连法(NJ)构建系统进化树,用MEGA4软件对遗传距离进行计算分析.结果 获得542 bp的斯氏并殖吸虫线粒体Cytb基因片段,通过在Gene-Bank数据库中Blast发现,斯氏并殖吸虫的Cytb序列与日本血吸虫(中国流行区虫种)、异盘并殖吸虫、哈氏并殖吸虫以及巨睾吸虫等7种吸虫有相似性,斯氏并殖吸虫与日本血吸虫的遗传距离近.结论 线粒体Cytb基因可作为吸虫遗传进化分类的依据之一,也是斯氏并殖吸虫与血吸虫等易出现较高的交叉反应率的原因之一.
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斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平分析
目的：研究斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb（cytochrome B）基因在不同虫期的转录水平以更深入了解该吸虫的物质代谢途径，探索药物作用的药靶。方法分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的总RNA ，并反转录为cDNA。将目的基因质粒作为标准品制作标准曲线，以5个虫期的cDNA为模板，特异引物为实验组引物，卫氏并殖吸虫的18SrDNA基因引物作为内参引物做实时荧光定量PCR ，分析斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因分别在5个虫期的转录水平。结果标准曲线线性关系良好，回归系数γ＝0．994。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示，斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb转录主要在囊蚴期、30 d幼虫期及60 d童虫期，并且是逐步升高趋势，但成虫期转录较少，虫卵期没有转录。结论斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平有差别，在60 d童虫期高转录，提示Cytb基因在幼虫的发育和移行中起着重要作用。
关键词： 斯氏狸殖吸虫 线粒体Cytb基因 Realtime PCR 转录水平
