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柯萨奇病毒B3的VP1DNA疫苗与蛋白或重组腺病毒疫苗不同组合免疫方式的免疫效果观察
目的 观察柯萨奇病毒B3 (Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1 DNA疫苗初免后VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime- boost策略的免疫效果.方法 用CVB3 VP1的真核表达质粒pcDNA3/VP1初次免疫小鼠后,分别用VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VPI加强免疫2次.检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体、中和抗体滴度以及脾脏细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)杀伤活性；致死量CVB3攻击后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果 pcDNA3/VP1 +VP1蛋白组小鼠血清IgG抗体、中和抗体滴度以及动物生存率明显高于pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1质粒组(P＜0.05)；pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠脾脏CTLs杀伤活性明显高于pcDNA3/VP1质粒组(P＜0.05).结论 质粒pcDNA3/VP1初次免疫后,VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime- boost策略有较好的免疫效果,两者比较pcDNA3/VP1 +VP1蛋白prime-boost免疫策略的效果更为明显.
关键词： 柯萨奇病毒B3 prime-boost DNA 蛋白 重组腺病毒 -
PEI增强G250 DNA疫苗和重组肽疫苗的prime-boost免疫策略研究
目的:探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME-BOOST免疫程序免疫增强效果.方法:用EcoR l、Xhol和EcoRI、Sall分别双酶切PVAX1及既往构建的pET28a (+)/C-G250肽-C质粒.利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定.大量提取质粒并分光光度计测质粒含量.将32只雌性昆明小鼠随机分为(A)裸DNA组,(B)DNA-PEI复合物组,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗组,(D)空白对照组.按O、1 0、20、30天程序经股四头肌注射免疫.C组在第20天及第30天进行蛋白冲击.初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度.流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4+和CD8+.结果:酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽cDNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中.昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1:1.28×104及CD4+、CD8+达26.12％和12.60％,明显高于A组的1:3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32％和10.74％.而蛋白冲击组的1:5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96％和15.14％,明显高于B组(P＞0.05).结论:成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C.该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应.证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用.为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法.
关键词： DNA疫苗 G250 PEI 佐剂 prime-boost -
初免-加强免疫策略在疫苗研究中的应用
大多数传统疫苗的免疫保护机理主要是诱导能维持较长时间的体液免疫应答,而大量研究显示机体在对抗胞内感染微生物及一些病毒的感染时,细胞免疫应答是至关重要的.鉴于初始-加强(Prime-Boost)免疫策略在诱导细胞免疫应答方面具备的优势,其显示了很好的应用前景,本文综述了Prime-Boost免疫策略在疫苗研究中的应用并对其机制进行了初步的探讨.
关键词： prime-boost 免疫策略 疫苗
