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雌性成虫肌蛋白-1文献资料
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广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆表达及免疫学效应分析
目的 对广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1(Ac-fmp-1)基因的开放读码框进行克隆、表达及重组蛋白的免疫学效应分析,评价其重组蛋白在免疫学诊断中的应用前景.方法 逆转录聚合酶链反应扩增目的基因,克隆至原核表达载体pET-30a-c(+),重组质粒转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子亲和层析(Ni-IDA)纯化分离表达产物.免疫印记(Western-blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫性.结果 广州管圆线虫Ac-fmp-1基因的编码区有1 251个碱基,编码417个氨基酸.原核表达载体pET-Ac-fmp-1构建成功,IPTG诱导表达获得了体外高效表达的重组融合蛋白,经亲和层析得到纯化蛋白.融合蛋白可被感染广州管圆线虫的SD大鼠血清及病人血清所识别;作为包被抗原用于ELISA检测大鼠血清其敏感性与特异性均为100％,与粗抗原无差别;检测广州管圆线虫病人血清敏感性为100％,与粗抗原有差别;检测其他寄生虫病人血清与正常病人血清其特异性为100％和98％,与粗抗原相比特异性较高.结论 广州管圆线虫Ac-fmp-1基因在原核表达系统获得高效表达,编码蛋白可能是虫体的重要抗原成分,在免疫学诊断方面有潜在的应用前景.
