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抗狂犬病毒核蛋白荧光标记抗体的制备和初步鉴定
目的建立抗狂犬病毒(RV)核蛋白(NP)荧光标记抗体的制备方法并进行初步鉴定.方法采用两种方法制备该试剂:1.从RV感染的细胞中提纯RV核糖核蛋白(RNP)作抗原,免疫动物然后制备荧光标记抗体;2.直接用本室原制备的4株抗 RV NP的单克隆抗体混合进行标记.结果制备的试剂有较高的敏感性和特异性,经与法国巴斯德诊断用品公司的相应产品进行比较,所得结果的符合率为100 %.特别是用后一种方法制备的试剂优点更多.结论该制品可替代进口产品,能用于狂犬病毒的快速检测.
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双表达狂犬病毒基因的非复制型痘苗病毒改建及免疫效果
为减少重组病毒非必需外源基因,进一步提高非复制重组痘苗病毒狂犬病疫苗的安全性,本研究改建不含报道基因LacZ的双表达狂犬病毒Ag株G、N的非复制重组痘苗病毒VTKRG△CKRN.采用G418-neo富集、蓝白斑及免疫蚀斑筛选等方法,以表达狂犬病毒糖蛋白(RG)基因的非复制重组痘苗病毒VTKRG△CKlacZ作为亲本株,利用同源重组原理,删除C与K片断间lacZ,并将狂犬病毒核蛋白(RN)基因插入C-K片段间.经核酸及蛋白水平检测表明VTKRG△CKRN能同时稳定有效地表达狂犬病毒G和N,并具有非复制病毒生长特性.重组病毒裸鼠毒力实验表明VTKRG△CKRN较复制型重组痘苗病毒VTKRG病毒毒力显著减弱.VTKRG△CKRN免疫小鼠可诱生较高有效中和抗体,并能保护小鼠免于致死剂量狂犬病毒攻击.以1.6×106PFU较低免疫剂量、仅一次免疫狗可保护狗经致死量中国狂犬病毒街毒株SBD株攻击后存活,诱生具有保护性中和抗体.非复制狂犬-痘苗重组病毒VTKRG△CKRN免疫效果好、更具安全性.
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狂犬病毒核蛋白(NP)的纯化及其免疫原性的研究
对重组痘苗病毒和重组杆状病毒表达的狂犬病毒NP及原代地鼠肾 细胞培养的狂犬病毒核衣壳蛋白（RNP），先经Sepharose CL 4B分子筛柱初步提纯，再以抗 狂犬病毒NP McAB 2C12-Sepharose 4B亲和层析柱纯化分离，经ELISA，SDS-PAGE电泳和We stern-Blot分析证实，获得了高纯度和免疫反应性的NP和RNP。以相同剂量的纯化蛋白免疫 小鼠，RNP和两种重组NP均可诱生特异的抗NP抗体，三种蛋白间无明显差异；狂犬病毒CVS株 攻击保护实验结果显示，三种蛋白免疫的小鼠存活率约为50%；两种重组NP的免疫反应性和 免疫原性与天然狂犬病毒RNP相似。
