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原浆柱蛋白特异性区段文献资料
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莱姆病螺旋体83kD原浆柱蛋白特异性区段的基因克隆与表达研究
目的为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原.方法根据莱姆病螺旋体83kD原浆柱蛋白(p83)特异性区段的基因序列,设计一对引物,采用PCR技术从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增p83特异性区段的基因片段,纯化扩增产物,用BamHI和Ec oRI双酶切后定向克隆入质粒载体pBK-CMV;转化大肠杆菌筛选重组克隆.用BamHI和EcoRI双酶切、PCR扩增和DNA序列测定对重组质粒进行鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达后进行SPS-PAGE和Western-blotting分析.结果 1)从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增出p83特异性区段的基因片段;2)将扩增所得的目的基因片段正向插入pBK-CMV的BamHI 和EcoRI位点,获得重组质粒pBX1.3)pBX1在大肠杆菌中诱导表达后获得29kD含β-半乳糖苷酶氨基末端片段的重组抗原.结论成功构建了莱姆病螺旋体83kD原浆柱蛋白特异性区段的基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得了稳定的表达,为进一步研究该重组抗原在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础.
关键词： 莱姆病螺旋体 原浆柱蛋白特异性区段 基因克隆 表达
